Kluczowa różnica między RP HPLC a HIC polega na tym, że RP HPLC wykorzystuje bardziej polarną fazę ruchomą i mniej polarną fazę stacjonarną. Natomiast HIC wykorzystuje hydrofobową fazę stacjonarną, która umożliwia przyłączanie się do niej hydrofobowych cząsteczek.
Chromatografia to technika analityczna, która pomaga rozdzielić mieszaninę na jej składniki. Najpierw musimy rozpuścić próbkę do rozdzielenia w roztwór. Ta mieszanina roztwór-substancja nazywana jest fazą ruchomą. Następnie faza ruchoma przechodzi przez inny materiał zwany fazą stacjonarną. Faza stacjonarna decyduje o separacji składników. Oddzielenie następuje w wyniku podziału materiału między fazę ruchomą i fazę stacjonarną.
Co to jest RP HPLC?
Termin RP HPLC oznacza wysokosprawną chromatografię cieczową z odwróconymi fazami. Polega na rozdzieleniu składników mieszaniny według hydrofobowości. Składniki hydrofobowe w fazie ruchomej łączą się z unieruchomionymi ligandami hydrofobowymi na fazie stacjonarnej, podczas gdy składniki hydrofilowe eluują przez fazę stacjonarną bez przyczepiania się do powierzchni fazy stacjonarnej.
Rysunek 01: Aparatura HPLC
Co więcej, metoda ta charakteryzuje się większą powtarzalnością w porównaniu z innymi technikami chromatograficznymi, a także wykazuje szerokie zastosowanie. Dlatego stosujemy tę metodę w laboratoriach w ponad 75% wszystkich metod HPLC. W większości przypadków jako fazę ruchomą stosujemy wodną mieszankę wody z mieszalnym polarnym rozpuszczalnikiem organicznym. Tym samym zapewni przyczepność składników hydrofobowych w roztworze do powierzchni fazy stacjonarnej.
Co to jest HIC?
Termin HIC oznacza chromatografię oddziaływań hydrofobowych. Jest to rodzaj HPLC z odwróconymi fazami, a metoda ta jest wykorzystywana głównie do separacji dużych biocząsteczek, takich jak białka. W tej metodzie do przygotowania próbki biomolekuły musimy użyć ośrodka wodnego. Dzieje się tak, ponieważ rozpuszczalniki organiczne mogą powodować denaturację białek. Ponadto technika ta wykorzystuje oddziaływanie między dużymi cząsteczkami o lekko hydrofobowej powierzchni fazy stacjonarnej. Co więcej, musimy użyć wysokiego stężenia soli w próbce, ponieważ zachęca to do zatrzymania białka na opakowaniu; ten proces nazywa się wysalaniem. Poprzez stopniowe zmniejszanie stężenia soli, możemy sprawić, że biocząsteczki będą eluować oddzielnie, zgodnie z ich hydrofobowością.
Zazwyczaj ta metoda wykorzystuje warunki przeciwne do warunków chromatografii jonowymiennej. W tej technice najpierw musimy przepuścić przez kolumnę roztwór buforowy w celu zmniejszenia solwatacji substancji rozpuszczonej w próbce. Powoduje odsłonięcie hydrofobowych regionów białka. Jednakże, gdy cząsteczka jest bardziej hydrofobowa, do promowania wiązania potrzeba mniej soli. Tutaj mniej hydrofobowe substancje rozpuszczone są eluowane jako pierwsze, a zgodnie ze zmianą stężenia soli, bardziej hydrofobowe substancje rozpuszczone są eluowane jako ostatnie.
Jaka jest różnica między RP HPLC a HIC?
Chromatografia to technika analityczna służąca do rozdzielania składników w mieszaninie. RP HPLC i HIC to dwie specjalistyczne techniki chromatograficzne. Kluczowa różnica między RP HPLC a HIC polega na tym, że RP HPLC wykorzystuje bardziej polarną fazę ruchomą i mniej polarną fazę stacjonarną, podczas gdy HIC wykorzystuje hydrofobową fazę stacjonarną, która umożliwia przyłączanie się do niej hydrofobowych cząsteczek.
Poniższa infografika podsumowuje różnicę między RP HPLC a HIC.
Podsumowanie – RP HPLC vs. HIC
Chromatografia to technika analityczna służąca do rozdzielania składników w mieszaninie. RP HPLC i HIC to dwie specjalistyczne techniki chromatograficzne. Kluczowa różnica między RP HPLC a HIC polega na tym, że RP HPLC wykorzystuje bardziej polarną fazę ruchomą i mniej polarną fazę stacjonarną, podczas gdy HIC wykorzystuje hydrofobową fazę stacjonarną, która umożliwia przyłączanie się do niej hydrofobowych cząsteczek.
