Kluczowa różnica – cytometria przepływowa a FACS
W kontekście teorii komórki, komórki są podstawową jednostką strukturalną i funkcjonalną wszystkich żywych organizmów. Sortowanie komórek to metodologia wykorzystywana do oddzielania różnych komórek zgodnie z cechami fizjologicznymi i morfologicznymi. Mogą mieć cechy wewnątrzkomórkowe lub zewnątrzkomórkowe. Interakcje DNA, RNA i białek są uważane za właściwości interakcji wewnątrzkomórkowych, podczas gdy kształt, rozmiar i różne białka powierzchniowe są uważane za właściwości zewnątrzkomórkowe. We współczesnej nauce metodologie sortowania komórek doprowadziły do wspomagania różnych badań w badaniach biologicznych, a także w ustalaniu nowych zasad poprzez badania nad medycyną. Sortowanie komórek odbywa się w oparciu o różne metodologie, które obejmują zarówno prymitywne z mniejszym wyposażeniem, jak i zaawansowane technologicznie metodologie z użyciem wyrafinowanych maszyn. Cytometria przepływowa, sortowanie komórek aktywowanych fluorescencyjnie (FACS), magnetyczna selekcja komórek i sortowanie pojedynczych komórek to główne stosowane metodologie. Cytometria przepływowa i FACS zostały opracowane w celu różnicowania komórek na podstawie ich właściwości optycznych. FACS to wyspecjalizowany rodzaj cytometrii przepływowej. Cytometria przepływowa to metodologia wykorzystywana podczas analizy heterogenicznej populacji komórek według różnych cząsteczek powierzchni komórek, wielkości i objętości, która pozwala na badanie pojedynczych komórek. FACS to proces, w którym mieszanina próbek komórek jest sortowana do dwóch lub więcej pojemników zgodnie z ich charakterystyką rozpraszania światła i fluorescencji. Jest to kluczowa różnica między cytometrią przepływową a FACS.
Co to jest cytometria przepływowa?
Cytometria przepływowa to metoda stosowana do badania i określania ekspresji cząsteczek wewnątrzkomórkowych i powierzchni komórki oraz do definiowania i charakteryzowania różnych typów komórek. Jest również używany do określania objętości i wielkości komórek oraz do oceny czystości wyizolowanych subpopulacji. Pozwala to na wieloparametrową ocenę pojedynczych komórek mniej więcej w tym samym czasie. Cytometria przepływowa służy do pomiaru intensywności fluorescencji wytwarzanej przez przeciwciała znakowane fluorescencyjnie, które pomagają w identyfikacji białek lub ligandów wiążących się z powiązanymi komórkami.
Rysunek 01: Cytometria przepływowa
Ogólnie cytometria przepływowa obejmuje głównie trzy podsystemy. Są to płyny, elektronika i optyka. W cytometrii przepływowej dostępnych jest pięć głównych składników, które są wykorzystywane do sortowania komórek. Są to ogniwa przepływowe (strumień cieczy, który jest używany do ich transportu i wyrównywania ogniw w procesie wykrywania optycznego), system pomiarowy (może składać się z różnych systemów, w tym lamp rtęciowych i ksenonowych, chłodzonych wodą o dużej mocy lub chłodzone powietrzem lasery małej mocy lub lasery diodowe), ADC; Układ przetwornika analogowo-cyfrowego, układ wzmacniający i komputer do analizy. Akwizycja to proces, w którym dane są zbierane z próbek za pomocą cytometru przepływowego. W procesie tym pośredniczy komputer połączony z cytometrem przepływowym. Oprogramowanie obecne w komputerze analizuje informacje podawane do komputera z cytometru przepływowego. Oprogramowanie posiada również możliwość dostosowania parametrów eksperymentu sterującego cytometrem przepływowym.
Co to jest FACS?
W kontekście cytometrii przepływowej, sortowanie komórek aktywowane fluorescencją (FACS) to metoda wykorzystywana do różnicowania i sortowania próbki mieszaniny komórek biologicznych. Komórki są oddzielone od dwóch lub więcej pojemników. Metoda sortowania opiera się na cechach fizycznych komórki, która obejmuje rozpraszanie światła i charakterystykę fluorescencji komórki. Jest to ważna technika naukowa, którą można wykorzystać do uzyskania wiarygodnych wyników ilościowych i jakościowych sygnałów fluorescencyjnych emitowanych z każdej komórki. Podczas FACS początkowo uzyskana mieszanina komórek; zawiesina kierowana jest do środka wąskiego strumienia cieczy, która szybko płynie. Przepływ cieczy jest zaprojektowany tak, aby oddzielić komórki w zawiesinie na podstawie średnicy każdej komórki. Na strumień zawiesiny działa mechanizm wibracji, w wyniku którego powstają pojedyncze krople.
Rysunek 02: FACS
System jest kalibrowany w celu utworzenia pojedynczej kropli z jedną komórką. Tuż przed utworzeniem się kropel zawiesina przepływowa porusza się wzdłuż aparatu do pomiaru fluorescencji, który wykrywa charakterystykę fluorescencji każdej komórki. W miejscu powstawania kropelek umieszczany jest elektryczny pierścień ładujący, którego ładunek jest indukowany do pierścienia przed pomiarem natężenia fluorescencji. Po utworzeniu kropelek ze strumienia zawiesiny ładunek zostaje uwięziony w kropelkach, który następnie wchodzi do układu odchylania elektrostatycznego. Zgodnie z ładunkiem system kieruje kropelki do różnych pojemników. Sposób nakładania ładunku różni się w zależności od różnych systemów wykorzystywanych w FACS. Sprzęt używany w FACS jest znany jako sorter komórek aktywowany fluorescencją.
Jakie jest podobieństwo między cytometrią przepływową a FACS?
Cytometria przepływowa i FACS zostały opracowane w celu różnicowania komórek na podstawie ich właściwości optycznych
Jaka jest różnica między cytometrią przepływową a FACS?
Cytometria przepływowa a FACS |
|
| Cytometria przepływowa to metodologia stosowana podczas analizy heterogenicznej populacji komórek według różnych cząsteczek powierzchni komórek, wielkości i objętości, która umożliwia badanie pojedynczych komórek. | FACS to proces, w którym mieszanina próbek komórek jest sortowana do dwóch lub więcej pojemników zgodnie z ich charakterystyką rozpraszania światła i fluorescencji. |
Podsumowanie – Cytometria przepływowa a FACS
Komórka jest podstawową jednostką strukturalną i funkcjonalną wszystkich żywych organizmów. Sortowanie komórek to proces, w którym komórki są izolowane i różnicowane na różne kategorie w oparciu o ich właściwości wewnątrzkomórkowe i zewnątrzkomórkowe. Cytometria przepływowa i FACS to dwie ważne metodologie sortowania komórek. Oba procesy opracowano w celu różnicowania komórek według ich właściwości optycznych. Cytometria przepływowa to metodologia wykorzystywana podczas analizy heterogenicznej populacji komórek według różnych cząsteczek powierzchni komórek, wielkości i objętości, która pozwala na badanie pojedynczych komórek. FACS to proces, w którym mieszanina próbek komórek jest sortowana do dwóch lub więcej pojemników zgodnie z ich charakterystyką rozpraszania światła i fluorescencji. To jest różnica między cytometrią przepływową a FACS.
Pobierz wersję PDF cytometrii przepływowej i FACS
Możesz pobrać wersję PDF tego artykułu i używać jej do celów offline zgodnie z notatką cytowania. Proszę pobrać wersję PDF tutaj Różnica między cytometrią przepływową a FACS
