Kluczowa różnica – CFU vs MPN
Jednostka tworząca kolonie (CFU) i Najbardziej prawdopodobna liczba (MPN) to dwie metody stosowane do zliczania mikroorganizmów w próbkach. Oba parametry służą do wykrywania jakości wody i bakterii wskaźnikowych kału w próbkach wody. Jednostka tworząca kolonie jest miarą używaną do zliczenia liczby żywotnych komórek bakteryjnych lub komórek grzybów w określonej objętości lub masie danej próbki. Standardową jednostką dla tego parametru jest CFU/ml lub CFU/g. Najbardziej prawdopodobna liczba to kolejna jednostka używana do pomiaru liczby żywych komórek bakteryjnych w próbce cieczy. Kluczowa różnica między CFU i MPN polega na tym, że CFU oblicza się z kolonii bakterii i grzybów rosnących na stałej płytce agarowej, podczas gdy MPN oblicza się z żywych bakterii rosnących w płynnej pożywce.
Co to jest CFU?
Jednostka tworząca kolonię (CFU) to parametr, który mierzy liczbę żywotnych komórek bakterii lub grzybów w danej próbce. Metoda zliczania jednostek tworzących kolonie jest określana jako standardowa liczba płytek. Żywe kolonie, które pojawiają się na płytkach agarowych, są wyrażane jako CFU na 1 ml (jednostka tworząca kolonię na mililitr) próbki w przypadku cieczy lub CFU na 1 g (jednostka tworząca kolonię na jeden gram) próbki dla substancji stałych.
Istnieją dwie popularne metody pomiaru CFU w próbce. Są to metoda talerzykowa i talerzykowa. Te dwie metody wspiera technika zwana seryjnym rozcieńczaniem. Seryjnie rozcieńczone próbki umożliwiają uzyskanie policzalnej liczby kolonii na powierzchni agaru. Znaną objętość próbki można rozprowadzić na powierzchni płytki agarowej lub zmieszać z agarem i wylać na płytkę. Płytkę następnie inkubuje się i zlicza powstające kolonie. Liczba kolonii odnosi się do liczby drobnoustrojów w oryginalnej próbce. Płytki, które pokazują zbyt wiele kolonii lub zbyt mało kolonii, są wyłączone z liczenia, ponieważ wyniki na tych płytkach mogą nie być dokładne statystycznie. Statystycznie najlepszy zakres to 30 – 300 kolonii na płytce agarowej. W związku z tym należy wybrać właściwe płytki w celu dokładnego zliczenia. Dla powyższej funkcji wykonywane jest rozcieńczenie seryjne.
Po policzeniu żywych kolonii na płytkach, CFU/ml można obliczyć przy użyciu następującego równania.
CFU na ml oryginalnej próbki=liczba kolonii na płytce X współczynnik rozcieńczenia
Współczynnik rozcieńczenia=(1/ Rozcieńczenie płytki)
Na przykład, jeśli uzyskasz 149 kolonii na płytce w rozcieńczeniu 10-4, liczbę bakterii w 1 ml oryginalnej próbki można obliczyć w następujący sposób:
CFU/ml=(149) x (1/10-4)
=149 × 104 lub 1490000
=1. 49 x 106
Rysunek 01: Jednostka tworząca kolonie
Co to jest MPN?
Najbardziej prawdopodobna liczba jest miarą alternatywną do CFU/ml. MPN szacuje również żywotne komórki w próbce cieczy. Liczy organizmy rosnące w płynnej kulturze i jest głównie techniką bakteriologiczną. Metoda ta jest szczególnie użyteczna dla próbek, które zawierają niskie stężenia komórek bakteryjnych; na przykład mleko, woda pitna itp. Wartość MPN jest wyrażona dla 100 ml objętości. MPN opiera się na metodzie statystycznej opartej na teorii prawdopodobieństwa. Istnieją tabele statystyczne zaprojektowane w celu znalezienia wartości MPN na 100 ml próbki. Poniższe tabele przedstawiają wyniki przy 95% granicach ufności.
Wartość MPN jest obliczana po wykonaniu techniki zwanej metodą fermentacji w wielu probówkach. Trzy zestawy probówek zawierające odpowiednią pożywkę hodowlaną zaszczepia się trzema różnymi objętościami próbki, takimi jak 10 ml, 1 ml i 0.1 ml i inkubować do wzrostu. Po okresie inkubacji probówki ocenia się + (dodatni) lub – (ujemny) pod kątem obecności lub braku wzrostu. Wzór wyników pozytywnych i negatywnych jest następnie porównywany z tabelą MPN prawdopodobieństw statystycznych w celu oszacowania liczby mikroorganizmów. Następnie podawana jest wartość MPN dla 100 ml próbki. MPN jest szeroko stosowany do wykrywania bakterii z grupy coli obecnych w próbkach wody.
Rysunek 02: Tabela MPN
Jaka jest różnica między CFU a MPN?
CFU a MPN |
|
| CFU to miara używana do wyrażania liczby żywotnych kolonii bakterii lub grzybów w danej próbce. | MPN jest alternatywą dla CFU i mierzy liczbę żywych komórek bakteryjnych w próbce płynnej. |
| Jednostka | |
| CFU/ml lub CFU/g | MPN/100 ml |
| Obliczenia | |
| CFU oblicza się, licząc liczbę kolonii wyhodowanych na płytkach agarowych. | MPN jest obliczany przez porównanie pozytywnych i negatywnych wzorców probówek z tabelą statystyczną MPN. |
| Technika seryjnego rozcieńczania | |
| Seryjne rozcieńczanie wykonuje się przed umieszczeniem próbek na płytkach agarowych. | Rozcieńczanie seryjne nie jest normalnie wykonywane podczas obliczania MPN |
| Metody | |
| Metoda płytki rozprowadzającej i metoda płytki wylewania to dwa rodzaje metod stosowanych w celu uzyskania CFU. | Fermentacja w wielu probówkach to metoda stosowana w celu uzyskania wartości MPN. |
Podsumowanie – CFU vs MPN
Pomiar wzrostu drobnoustrojów jest wymagany z wielu powodów. W zakładach przetwórstwa spożywczego niezbędny jest pomiar poziomu i rodzaju drobnoustrojów w żywności. W przemyśle spożywczym i medycynie konieczne jest zapewnienie skutecznego stosowania zabiegów sterylizacyjnych. W oczyszczalniach ścieków wymagane jest rutynowe liczenie drobnoustrojów. Podczas optymalizacji procedury w biologii molekularnej wymagany jest pomiar liczby kolonii na płytkach. W związku z tym dostępne są różne metody wyliczania i pomiaru wzrostu. CFU i MPN to dwie takie metody szeroko stosowane w różnych dziedzinach. CFU jest miarą liczby żywotnych kolonii bakterii i grzybów obecnych w danej próbce. Oblicza się ją przy użyciu standardowej metody liczenia płytek lub metody liczenia żywych płytek. MPN to kolejna miara, która wyraża liczbę komórek bakteryjnych obecnych w danej objętości próbki cieczy. Jest obliczany przy użyciu metody fermentacji w wielu probówkach i tabeli MPN. To jest różnica między CFU a MPN.
Pobierz wersję PDF CFU vs MPN
Możesz pobrać wersję PDF tego artykułu i używać jej do celów offline, zgodnie z notatkami dotyczącymi cytowań. Proszę pobrać wersję PDF tutaj Różnica między CFU a MPN.
