Kluczowa różnica między immunoprecypitacją a koimmunoprecypitacją polega na tym, że immunoprecypitacja to technika wytrącania białka z roztworu przy użyciu określonego przeciwciała, podczas gdy koimmunoprecypitacja to technika, która wytrąca nienaruszone kompleksy białkowe z roztworu przy użyciu określonego przeciwciała.
Interakcja antygen-przeciwciało to specyficzna interakcja chemiczna między przeciwciałami wytwarzanymi przez komórki B a antygenami (białkami) podczas reakcji immunologicznej. Normalnie, rozpuszczalne antygeny łączą się z rozpuszczalnymi przeciwciałami w obecności elektrolitu w rozpuszczalnej temperaturze i pH, tworząc nierozpuszczalny widoczny kompleks. Nazywa się to reakcją strącania. Dlatego immunoprecypitacja i koimmunoprecypitacja to dwa rodzaje reakcji precypitacji, które są rutynowo stosowane w laboratoriach do identyfikacji białek, takich jak antygeny.
Co to jest immunoprecypitacja?
Immunoprecypitacja to technika wytrącania białka z roztworu przy użyciu określonego przeciwciała. Czasami ta technika jest również znana jako indywidualna immunoprecypitacja białek. Immunoprecypitacja wykorzystuje przeciwciało do izolacji wybranego białka będącego przedmiotem zainteresowania z lizatu komórkowego. Przeciwciało oczyszcza swoje specyficzne białko docelowe lub antygen z mieszaniny. Przeciwciało wiąże się z białkiem, a kompleks przeciwciało-antygen jest wyciągany z próbki. W układzie doświadczalnym kompleks antygen-przeciwciało jest wyciągany przy użyciu agarozy sprzężonej z białkiem A/G lub kulek magnetycznych. Później perełki są płukane i białko będące przedmiotem zainteresowania jest eluowane. Oczyszczone białko lub antygen uzyskany przez immunoprecypitację jest weryfikowany różnymi technikami, takimi jak test immunoenzymatyczny (ELISA) i western blot (WB).
Rysunek 01: Immunoprecypitacja
Ponadto wyizolowane białka lub antygeny można oznaczyć ilościowo i zidentyfikować za pomocą spektrometrii mas przy użyciu wzorców trawienia enzymatycznego opartych na sekwencji pierwszorzędowej. Przed rozpoczęciem eksperymentu z immunoprecypitacją należy wziąć pod uwagę pewne kwestie: wybór formatu metody, białka wiążące i perełki, wybór właściwego przeciwciała pierwotnego i izotypu oraz kontrola negatywna.
Co to jest koimmunoprecypitacja?
Koimmunoprecypitacja to technika wytrącania nienaruszonych kompleksów białkowych z roztworu przy użyciu specyficznego przeciwciała. Koimmunoprecypitacja generalnie działa poprzez wybór specyficznego przeciwciała, które jest skierowane na znane białko (antygen), które uważa się za członek większego kompleksu białek. Celując w znanego członka za pomocą swoistego przeciwciała, możliwe jest wyciągnięcie całego kompleksu białkowego z roztworu. Umożliwia to identyfikację nieznanych członków kompleksu. Koncepcja wyciągania kompleksów białkowych z roztworu jest czasami określana jako mechanizm „wyciągania”.
Rysunek 02: B Koimmunoprecypitacja
Koimmunoprecypitacja to potężna technika wykorzystywana do analizy interakcji białko-białko. Głównym celem koimmunoprecypitacji jest identyfikacja partnerów wchodzących w interakcje, takich jak ligandy, kofaktory lub cząsteczki sygnałowe do białka będącego przedmiotem zainteresowania. Co więcej, koimmunoprecypitacja jest skuteczną techniką stosowaną do oddzielania białek od surowicy, lizatu komórkowego, tkanki homogenizowanej lub pożywki kondycjonowanej.
Jakie są podobieństwa między immunoprecypitacją a koimmunoprecypitacją?
- Immunoprecypitacja i koimmunoprecypitacja to dwa rodzaje technik opartych na reakcji strącania.
- Obu technik można użyć do identyfikacji docelowego antygenu za pomocą określonego przeciwciała.
- Obie techniki silnie zależą od interakcji antygen-przeciwciało.
- Są rutynowo używane w laboratoriach klinicznych.
Jaka jest różnica między immunoprecypitacją a koimmunoprecypitacją?
Immunoprecypitacja to technika, która wytrąca białko z roztworu przy użyciu określonego przeciwciała, podczas gdy koimmunoprecypitacja to technika, która wytrąca nienaruszone kompleksy białkowe z roztworu przy użyciu określonego przeciwciała. Jest to więc kluczowa różnica między immunoprecypitacją a koimmunoprecypitacją. Ponadto immunoprecypitacja jest częściej stosowana w laboratoriach, podczas gdy koimmunoprecypitacja nie jest powszechnie stosowana w laboratoriach.
Poniższa infografika przedstawia różnice między immunoprecypitacją a koimmunoprecypitacją w formie tabelarycznej do bezpośredniego porównania.
Podsumowanie – immunoprecypitacja a koimmunoprecypitacja
Immunoprecypitacja i koimmunoprecypitacja to dwa rodzaje technik opartych na reakcji precypitacji, które zależą od interakcji antygen-przeciwciało. Technika immunoprecypitacji wytrąca białko z roztworu przy użyciu swoistego przeciwciała, podczas gdy technika koimmunoprecypitacji wytrąca z roztworu nienaruszone kompleksy białkowe przy użyciu swoistego przeciwciała. To podsumowuje różnicę między immunoprecypitacją a koimmunoprecypitacją.
