Kluczowa różnica – bezpośredni vs pośredni test ELISA
Test immunoenzymatyczny (ELISA), znany również jako test immunoenzymatyczny, to test serologiczny, który wykrywa przeciwciała we krwi. Jest używany jako narzędzie diagnostyczne do ustalenia, czy pacjent był narażony na konkretny rodzaj wirusa lub inny czynnik zakaźny (antygen) i czy organizm wytworzył przeciwciała przeciwko zakażeniu. ELISA może również zidentyfikować przeszłe i obecne infekcje. Dlatego ELISA jest często wykorzystywana przez lekarzy jako wstępny test przesiewowy przed dogłębną analizą chorób. Ten test można wykonać w laboratorium, pobierając próbkę krwi od pacjenta. Istnieją dwa rodzaje testu ELISA: bezpośredni ELISA i pośredni ELISA. Kluczowa różnica między bezpośrednim i pośrednim testem ELISA polega na tym, że pośredni test ELISA jest bardziej czuły i wymaga dodania przeciwciała drugorzędowego, podczas gdy bezpośredni test ELISA jest mniej czuły i wykorzystuje tylko przeciwciało pierwszorzędowe.
Co to jest bezpośrednia ELISA?
ELISA to test diagnostyczny choroby wykonywany w celu wykrycia obecności określonych antygenów lub przeciwciał we krwi. Odbywa się to jako test płytkowy. Wykorzystuje przeciwciała połączone z łatwo testowanymi enzymami. Obecność antygenów w próbce surowicy wiąże się ze specyficznymi przeciwciałami związanymi z enzymami. W ostatnim etapie dodawany jest specyficzny substrat, który reaguje z enzymem. Enzym przekształca substrat w barwny lub wytwarzający sygnał produkt. Zmiana koloru substratu chemicznego wskazuje na obecność określonego przeciwciała w próbce surowicy. Bezpośredni test ELISA wykorzystuje tylko pierwotne przeciwciało połączone z enzymem. Po związaniu z antygenem szybko zmienia kolor, wskazując na obecność czynnika zakaźnego we krwi. Jednak intensywność sygnałów jest słabsza w bezpośrednim teście ELISA, ponieważ epitopy są ograniczone do wiązania antygenów. W związku z tym bezpośredni test ELISA jest mniej czuły w porównaniu z pośrednim testem ELISA.
Rysunek 01: Bezpośredni test ELISA
Co to jest pośredni test ELISA?
ELISA można przeprowadzić przy użyciu dwóch rodzajów przeciwciał, a mianowicie; przeciwciało pierwszorzędowe i przeciwciało drugorzędowe. Narzędzie do pośredniego testu ELISA wykorzystuje oba typy przeciwciał do wzmocnienia sygnałów w celu lepszego wykrywania. Pośrednia technika ELISA jest wykonywana w następujący sposób.
- Płytki są inkubowane z antygenami i płukane w celu zablokowania niespecyficznego wiązania.
- Następnie dodawane są i płukane przeciwciała podstawowe.
- Dodaje się i przemywa drugorzędowe przeciwciało enzymatyczne.
- Dodaje się substrat i pozwala na reakcję z enzymami.
- Wykrywane są sygnały i identyfikowana jest obecność lub brak określonego antygenu w próbce.
W pośrednim teście ELISA, kilka przeciwciał drugorzędowych może wiązać się z jednym przeciwciałem pierwszorzędowym. Przeciwciała wtórne są połączone z łatwymi do oznaczenia enzymami. Dlatego jedno wiązanie może dać silny sygnał z powodu więcej niż jednej interakcji. W związku z tym pośredni test ELISA jest bardziej czuły niż bezpośredni test ELISA. Jednak pośredni test ELISA może dawać niespecyficzne sygnały z powodu reakcji krzyżowych przeciwciał drugorzędowych.
Rysunek 02: Pośredni test ELISA
Jaka jest różnica między bezpośrednim a pośrednim testem ELISA?
Bezpośredni vs pośredni test ELISA |
|
| Bezpośredni test ELISA jest mniej czuły w porównaniu z pośrednim testem ELISA. | Pośredni test ELISA jest bardziej czuły. |
| Czas zajęty | |
| Bezpośredni test ELISA to szybki proces. | Pośredni test ELISA jest czasochłonny. |
| Użycie przeciwciał | |
| Tylko jeden typ przeciwciał (przeciwciała podstawowe) jest używany w bezpośrednim teście ELISA. | Pierwotne i drugorzędowe przeciwciała są używane do pośredniego testu ELISA. |
| Połącz z enzymami | |
| Pierwotne przeciwciała są połączone z enzymami. | Wtórne przeciwciała są połączone z enzymami. |
| Reaktywność krzyżowa drugich przeciwciał | |
| Bezpośredni test ELISA eliminuje reaktywność krzyżową drugich przeciwciał. | Na pośredni test ELISA wpływa reaktywność krzyżowa drugich przeciwciał. |
| Sygnały | |
| Sygnały są słabe w porównaniu z pośrednim testem ELISA. | Sygnały są wzmacniane w pośrednim teście ELISA. Dlatego łatwo go wykryć. |
Podsumowanie – ELISA bezpośredni vs pośredni
ELISA to technika biochemiczna stosowana głównie w immunologii do wykrywania obecności przeciwciała lub antygenu w próbce krwi pacjenta. Można go przeprowadzić za pomocą dwóch procesów znanych jako bezpośredni lub pośredni test ELISA. Bezpośredni test ELISA wykorzystuje tylko przeciwciała pierwszorzędowe do wykrywania antygenu, podczas gdy pośredni test ELISA wykorzystuje zarówno przeciwciała pierwszorzędowe, jak i drugorzędowe. W bezpośrednim teście ELISA znakowane są przeciwciała pierwszorzędowe, podczas gdy w teście pośrednim ELISA znakowane są przeciwciała drugorzędowe. To jest różnica między bezpośrednim i pośrednim testem ELISA.
