Kluczowa różnica między CLIA i ECLIA polega na tym, że CLIA wykorzystuje metodę chemiczną do generowania chemiluminescencji, podczas gdy ECLIA wykorzystuje metodę elektrochemiczną do generowania sygnałów chemiluminescencji w technice testu immunologicznego.
Testy immunologiczne są szeroko stosowane w identyfikacji i ilościowym oznaczaniu białek związanych z chorobami lub infekcjami. Dlatego opierają się głównie na koncepcji wiązania przeciwciało-antygen. Istnieje wiele rodzajów testów immunologicznych, a testy chemiluminescencyjne są jedną z takich nowych technik rozwojowych. Zarówno CLIA, jak i ECLIA wykorzystują wskaźniki chemiluminescencyjne.
Co to jest CLIA?
Chemiluminescent Immunoassay (CLIA) to rodzaj testu immunologicznego, który do wykrywania wykorzystuje cząsteczkę luminescencyjną. Luminescencja emitowana przez cząsteczkę jest wykrywana na spektrofotometrze, zwykle przy długości fali między 300 – 800 nm. Chemoluminescencja powoduje wzbudzenie atomów, a technika identyfikuje egzergiczne reakcje chemiczne jako najbardziej odpowiednie źródło energii do wzbudzenia.
Technika CLIA ma dwie główne metody: bezpośrednia technika CLIA i pośrednia technika CLIA. Bezpośrednia technika CLIA wykorzystuje bezpośrednie markery luminoforowe, które są związane z celem, natomiast pośrednia metoda CLIA wykorzystuje markery enzymatyczne. Bezpośrednie markery luminoforowe obejmują estry kwasu i rutenu, natomiast pośrednie obejmują fosfatazę alkaliczną z substratem adamantyl-1,2-dioksetanoarylofosforanu (AMPPD) oraz peroksydazę chrzanową z luminolem lub jego pochodnymi jako substratem.
Rysunek 01: Chemiluminescencja
Kluczowe zalety CLIA to szeroki zakres dynamiczny funkcjonalności, wysoka intensywność dostarczania sygnału, brak zakłóceń tła, wysoka specyficzność, szybkość, stabilność i kompatybilność z różnymi protokołami testów. W przeciwieństwie do tego, ich wysoki koszt i ograniczenia w odniesieniu do wykrywania antygenów i paneli testowych są wadami CLIA.
Co to jest ECLIA?
Electrochemiluminescencja Immunoassay (ELCIA) to nowatorska technika opracowywania testów immunologicznych, która wykorzystuje koncepcję elektrochemiluminescencji. W koncepcji elektroluminescencji półprodukty powstają elektrochemicznie. Te elektronicznie generowane półprodukty osiągają następnie stan wzbudzony i powodują emisję światła. Długość fali, w której emitowane jest światło, odpowiada przerwie energetycznej. W ten sposób powstaje chemiluminescencja dzięki elektrochemicznemu wytwarzaniu jednego lub większej liczby reagentów na elektrodzie.
ECLIA to przydatna aplikacja analityczna o wysokiej czułości i swoistości. Stosowany jest głównie w identyfikacji białek związanych z różnymi stanami patologicznymi i medycznymi. Jego kluczowe zalety to szerszy zakres dynamiczny, wszechstronność, kontrola przestrzenna i czasowa poprzez zastosowanie potencjałów elektrod, wysoka czułość do zakresów pikomolarnych. Jednak fakt, że wymaga fachowej obsługi i związane z tym wysokie koszty, to jego wady.
Jakie są podobieństwa między CLIA i ECLIA?
- Obie techniki opierają się na koncepcji wiązania antygen-przeciwciało.
- Ponadto oba są używane głównie do diagnostyki chorób opartej na ilościowej ocenie białek.
- Obie metody są czułe i specyficzne.
- Wykorzystują koncepcję chemiluminescencji do wykrywania.
- Mogą być zautomatyzowane.
- Oba wymagają spektrofotometru do wykrywania.
- Oba mają szeroki zakres dynamiczny.
- Są to kosztowne techniki.
Jaka jest różnica między CLIA a ECLIA?
CLIA to technika testu immunologicznego wykorzystująca teorię chemiluminescencji, natomiast ECLIA to technika testu immunologicznego wykorzystująca teorię elektrochemii sprzężoną z chemiluminescencją. To jest więc kluczowa różnica między CLIA i ECLIA. Dlatego CLIA wykorzystuje reakcje chemiczne, które prowadzą do powstania sygnałów chemiluminescencyjnych, podczas gdy ECLIA wykorzystuje reakcje elektrochemiczne, które prowadzą do rozwoju sygnałów chemiluminescencyjnych.
Poniższa infografika przedstawiająca różnicę między CLIA i ECLIA pokazuje więcej porównań między obiema technikami.
Podsumowanie – CLIA vs ECLIA
CLIA i ECLIA to techniki, które odgrywają ważną rolę w diagnostyce chorób. Są to zaawansowane metody immunodiagnostyki oparte na koncepcji wiązania przeciwciało-antygen. Kluczową różnicą między CLIA i ECLIA jest metoda generowania chemiluminescencji. Podczas gdy CLIA wykorzystuje reakcje chemiczne do generowania chemiluminescencji po związaniu przeciwciało-antygen, ECLIA wykorzystuje reakcje elektrochemiczne do generowania chemiluminescencji. Jednak obie techniki są szybkie i specyficzne.
