Kluczowa różnica – strona SDS vs Western Blot
Western blotting to technika, która wykrywa określone białko w próbce białka. Technika ta jest wykonywana w kilku kluczowych etapach: elektroforeza żelowa, blotting i hybrydyzacja. Elektroforeza w żelu poliakrylamidowym z dodecylosiarczanem sodu (SDS Page) jest rodzajem techniki elektroforezy żelowej, która służy do rozdzielania białek według ich wielkości (masy cząsteczkowej). Western blot to specjalny arkusz membrany do blottingu, który służy do przenoszenia tego samego wzoru białek na stronie SDS. Kluczowa różnica między SDS Page i Western blot polega na tym, że SDS Page umożliwia oddzielenie białek w mieszaninie, podczas gdy western blot umożliwia wykrywanie i oznaczanie ilościowe określonego białka z mieszaniny. Oba są przydatne w badaniach analizy białek.
Co to jest strona karty charakterystyki?
SDS Page to technika elektroforezy żelowej używana do separacji białek. Jest powszechnie stosowany w biochemii, genetyce, kryminalistyce i biologii molekularnej. Po wyekstrahowaniu białek z próbki, są one umieszczane w żelu złożonym z SDS i poliakrylamidu. SDS jest detergentem anionowym stosowanym do linearyzacji białek (białek denaturujących) i do nadawania ujemnego ładunku linearyzowanym białkom proporcjonalnie do ich masy cząsteczkowej. Poliakrylamid staje się stałym nośnikiem żelu. Zdenaturowane białka, które są naładowane ujemnie, migrują przez żel w kierunku dodatniego końca aparatu. W zależności od rozmiarów białek, prędkości migracji różnią się między białkami i następuje separacja. Dlatego strona SDS jest przydatna do rozdzielania poszczególnych białek na podstawie ich wielkości.
Przygotowanie żelu poliakrylamidowego do frakcjonowania białek jest kluczowym etapem w SDS Page. Prawidłowe stężenie poliakryloamidu oraz rodzaj zastosowanego środka sieciującego silnie wpływają na właściwości fizyczne żelu, co powoduje faktyczne oddzielenie różnych białek. Wielkość porów żelu powinna być odpowiednio dobrana, aby zapewnić skuteczną separację. Jednak SDS Page jest uważana za technikę separacji białek o wysokiej rozdzielczości.
Technika SDS Page ma poważne ograniczenia w analizie białek. Ponieważ SDS denaturuje białka przed rozdziałem, nie pozwala na wykrycie aktywności enzymatycznej, interakcji wiążących białka, kofaktorów białkowych itp.
Rysunek 01: Strona SDS
Co to jest Western Blot?
Technika Western blot umożliwia wykrycie określonego białka z mieszaniny białek oraz pomiar ilości i masy cząsteczkowej białka. Western blot to membrana stosowana podczas procedury blottingu w celu uzyskania lustrzanego obrazu wzorców białkowych w żelu poliakrylamidowym SDS. Membrana używana do western blottingu składa się głównie z nitrocelulozy lub difluorku poliwinylidenu (PVDF). Membranę z przeniesionym białkiem można wykorzystać do identyfikacji pożądanego białka. Wymaga wysokiej jakości przeciwciała do wykrywania pożądanego białka przez hybrydyzację. Przeciwciało wiąże się ze swoim specyficznym antygenem i ujawnia obecność pożądanego antygenu, którym jest białko.
Transfer białek z żelu poliakryloamidowego SDS do Western blot przeprowadza się metodą elektroblottingu. Jest to skuteczna i szybka metoda, która powoduje, że białka wychodzą z żelu elektroforetycznie i przechodzą na błonę nitrocelulozową (western blot).
Rysunek 02: Western Blot
Jaka jest różnica między SDS Page a Western Blot?
Strona SDS kontra Western Blot |
|
| SDS Page to technika elektroforezy żelowej. | Western blot to technika wykonywana na membranie w celu wykrycia określonego białka w mieszaninie. |
| Użyj | |
| Strona SDS umożliwia separację białek zgodnie z ich rozmiarami. | Western blot umożliwia przenoszenie białek na żelu SDS page bez zmiany jego wzoru i umożliwia hybrydyzację ze specyficznymi przeciwciałami. |
| Wady | |
| Denaturacja białek, wysoki koszt i obecność chemikaliów neurotoksyn to wady tej techniki. | Ta technika jest czasochłonna i wymaga dobrego doświadczonego osobistego i ściśle kontrolowanych warunków. |
Podsumowanie – strona SDS kontra Western Blot
SDS page i western blot to dwie metody zaangażowane w analizę białek. SDS Page umożliwia łatwe rozdzielenie białek na żelu w zależności od ich masy cząsteczkowej. Western blot pomaga potwierdzić obecność i ilość określonego białka poprzez hybrydyzację ze specyficznymi przeciwciałami. To jest różnica między SDS Page a western blot.
