Kluczowa różnica – elektroforeza żelowa a strona SDS
Elektroforeza żelowa to technika, która oddziela makrocząsteczki w polu elektrycznym. Jest to powszechna metoda w biologii molekularnej do oddzielania DNA, RNA i białek z mieszanin zgodnie z ich rozmiarami cząsteczkowymi. SDS Page to rodzaj elektroforezy żelowej, która służy do oddzielania białek z mieszaniny białek na podstawie ich wielkości. Elektroforeza żelowa to termin używany w odniesieniu do normalnej techniki stosowanej do rozdzielania DNA, RNA i białek, podczas gdy SDS Page jest jednym z rodzajów elektroforezy żelowej. To jest kluczowa różnica między elektroforezą żelową a SDS Page.
Co to jest elektroforeza żelowa?
Elektroforeza żelowa jest powszechną techniką stosowaną w laboratoriach do oddzielania naładowanych cząsteczek, takich jak DNA, RNA, białka itp. z ich mieszanin. W elektroforezie żelowej stosuje się żel. Działa jak sito molekularne. W elektroforezie żelowej stosowane są dwa rodzaje żeli, a mianowicie agaroza i poliakrylamid. Wybór żelu i preparatu żelowego są ważnymi czynnikami, które należy wziąć pod uwagę w elektroforezie żelowej, ponieważ wielkość porów żelu należy ostrożnie manipulować w celu dobrego rozdziału cząsteczek za pomocą elektroforezy żelowej. Elektroforeza żelowa ma pole elektryczne połączone z dwoma końcami żelu. Jeden koniec żelu wykazuje ładunek dodatni, podczas gdy drugi koniec jest naładowany ujemnie.
DNA i RNA są cząsteczkami naładowanymi ujemnie. Po załadowaniu ich do żelu od ujemnego końca żelu i przyłożeniu do pola elektrycznego, migrują przez pory żelu w kierunku dodatnio naładowanego końca żelu. Szybkość migracji zależy od ładunku i wielkości cząsteczki. Mniejsze cząsteczki łatwo migrują przez pory żelu niż większe cząsteczki. W związku z tym mniejsze cząsteczki pokonują dużą odległość przez żel, a większe pokonują niewielką odległość. Do obserwacji przemieszczania się cząsteczek po żelu stosuje się specjalne rodzaje barwników. Pole elektryczne jest przykładane przez pewien czas i zatrzymywane, aby zapobiec utracie molekuł i utrzymać molekuły w ich przemieszczonych pozycjach. W żelu można zaobserwować różne pasma. Te pasma reprezentują cząsteczki o różnych rozmiarach. Dlatego elektroforeza żelowa jest przydatna do różnicowania cząsteczek w zależności od ich wielkości.
Elektroforeza żelowa jest stosowana w różnych technikach jako technika preparatywna w biologii molekularnej, takich jak PCR, RFLP, klonowanie, sekwencjonowanie DNA, Southern blotting, mapowanie genomu itp.
Rysunek 01: Elektroforeza w żelu agarozowym
Co to jest strona karty charakterystyki?
Elektroforeza w żelu poliakrylamidowym z dodecylosiarczanem sodu (strona SDS) to rodzaj elektroforezy żelowej stosowanej do oddzielania białek. Kiedy elektroforeza żelowa jest używana do oddzielania białek, potrzebne są specjalne zabiegi, ponieważ białka nie są naładowane ujemnie, jak DNA i RNA i nie migrują w kierunku dodatniego lub ujemnego końca. W związku z tym białka są denaturowane i pokrywane ładunkiem ujemnym przed elektroforezą żelową. Odbywa się to za pomocą detergentu zwanego dodecylosiarczanem sodu (SDS). Elektroforeza żelowa wykorzystująca SDS i żel poliakrylamidowy jako podłoże nosi nazwę SDS Page. Technika ta jest powszechnie stosowana w biochemii, genetyce, kryminalistyce i biologii molekularnej.
Podczas strony SDS białka są mieszane z SDS. SDS rozkłada białka do liniowego kształtu i pokrywa je ładunkiem ujemnym proporcjonalnym do ich masy cząsteczkowej. Ze względu na ładunek ujemny cząsteczki białka migrują w kierunku dodatniego końca żelu i rozdzielają się zgodnie z ich masami cząsteczkowymi. W SDS Page poliakrylamid jest używany jako stałe podłoże dla żelu. Faktyczna separacja białek zależy głównie od właściwości żelu. W związku z tym należy starannie przygotować żel poliakrylamidowy i stosować odpowiednie stężenia poliakrylamidu. Żele poliakrylamidowe wykazują wysoką rozdzielczość niż żele agarozowe. Dlatego SDS Page jest uważana za technikę o wysokiej rozdzielczości do separacji białek.
SDS Page to rodzaj denaturującej elektroforezy żelowej. Ma poważne ograniczenia w analizie białek. Ponieważ SDS denaturuje białka przed rozdziałem, nie pozwala na wykrycie aktywności enzymatycznej, interakcji wiążących białka, kofaktorów białkowych itp.
Rysunek 02: Strona karty charakterystyki
Jaka jest różnica między elektroforezą żelową a SDS Page?
Elektroforeza żelowa a strona SDS |
|
| Elektroforeza żelowa to metoda przeprowadzana w celu oddzielenia makrocząsteczek za pomocą pola elektrycznego. | SDS Page to technika elektroforezy żelowej o wysokiej rozdzielczości stosowana do oddzielania białek na podstawie ich masy. |
| Gel Run | |
| Może być wykonywany w poziomie lub w pionie. | Strona SDS zawsze działa pionowo. |
| Podstawa separacji | |
| Oddzielenie następuje w zależności od ładunku i rozmiaru. | Separacja białek następuje w zależności od masy i ładunku. |
| Rozdzielczość | |
| Elektroforeza w żelu agarozowym ma niską rozdzielczość, a elektroforeza w żelu poliakrylamidowym ma wyższą rozdzielczość | Strona SDS ma lepszą rozdzielczość. |
| Denaturacja | |
| Elektroforeza żelowa obejmuje zarówno techniki denaturujące, jak i niedenaturujące. | Strona SDS denaturuje białka przed separacją. |
Podsumowanie – elektroforeza żelowa a strona SDS
Elektroforeza żelowa jest powszechną techniką stosowaną do separacji i analizy DNA, RNA i białek w oparciu o ich rozmiar i ładunek. Istnieją dwa główne rodzaje elektroforezy żelowej, a mianowicie elektroforeza w żelu agarozowym i elektroforeza w żelu poliakrylamidowym. Żele agarozowe są używane głównie do rozdzielania kwasów nukleinowych; gdy wymagana jest wyższa rozdzielczość, stosuje się żele poliakrylamidowe. SDS Page to rodzaj elektroforezy żelowej powszechnie stosowanej do rozdzielania złożonych mieszanin białek. Jest uważany za technikę separacji białek o wysokiej rozdzielczości. To jest różnica między elektroforezą żelową a SDS Page.
