Kluczowa różnica między filtracją żelową a chromatografią powinowactwa polega na tym, że chromatografia żelowa zależy od różnic w masie cząsteczkowej lub wielkości próbki analitu, podczas gdy chromatografia powinowactwa zależy od powinowactwa analitu do unieruchomionego ligandu.
Termin chromatografia w chemii analitycznej odnosi się do procesu rozdzielania składników w mieszaninie przy użyciu różnych technik. Chromatografia to zbiorcza nazwa, która reprezentuje różną liczbę różnych metod separacji.
Co to jest chromatografia filtracji żelowej?
Chromatografia filtracji żelowej to technika analityczna, w której rozdział składników zależy od różnicy masy cząsteczkowej lub wielkości. Ta technika jest również znana jako chromatografia wykluczania lub chromatografia molekularna. Technika separacji w tym procesie zależy od różnej zdolności cząsteczek w próbce do wchodzenia w pory ośrodka filtracji żelowej.
W technice filtracji żelowej faza stacjonarna zawiera kulki uwodnionego materiału podobnego do gąbki z porami o wymiarach cząsteczek zawierających wąski zakres rozmiarów. Jeśli przez kolumnę zawierającą te „sita molekularne” przepuszczamy roztwór wodny składający się z cząsteczek różnej wielkości, cząsteczki większe niż pory medium filtracyjnego szybko przemieszczają się przez kolumnę. W przeciwieństwie do tego, mniejsze cząsteczki wchodzą w pory żelu i mają tendencję do powolnego przemieszczania się przez kolumnę. Cząsteczki eluują z kolumny w kolejności malejącej wielkości cząsteczki. Tutaj granicą wykluczenia żelu jest masa cząsteczkowa najmniejszych cząsteczek, które nie są w stanie przeniknąć przez pory danego żelu.
Istnieją różne rodzaje technik filtracji żelowej, takie jak metoda pośredniej filtracji żelowej, filtracja żelowa w stanie stacjonarnym, dializa żelowa itp. Chromatografia metodą pośredniej filtracji żelowej jest przydatna w oznaczaniu wolnych hormonów tarczycy. Chromatografia żelowa w stanie ustalonym jest techniką pośrednią przydatną głównie do pomiaru wolnych steroidów, takich jak kortyzol, testosteron itp. Z drugiej strony dializa żelowa jest modyfikacją filtracji żelowej w stanie stacjonarnym, która jest stosunkowo prostsza.
Co to jest chromatografia powinowactwa?
Chromatografia powinowactwa to technika analityczna i metoda rozdziału, która zależy od specyficznej interakcji wiązania między unieruchomionym ligandem a jego partnerem wiążącym. Niektóre przykłady obejmują wiązanie przeciwciało-antygen, wiązanie enzym-substrat i wiązanie enzym-inhibitor. Dlatego ta technika ma wiele ważnych zastosowań w oczyszczaniu kwasów nukleinowych, oczyszczaniu białek z ekstraktów komórkowych i oczyszczaniu z krwi.
W tej technice najważniejszą właściwością jest unieruchomienie liganda. Możemy do tego użyć różnych materiałów, takich jak akrylany i żel krzemionkowy. Ważne jest, aby zapobiegać interferencji sterycznej cząsteczki docelowej z ligandem. Ponadto do fazy stałej przyłączony jest inhibitor. Nazywamy ten inhibitor odstępnikiem. Klasycznie dystanser składa się z łańcucha węglowodorowego.
Faza stacjonarna chromatografii powinowactwa zawiera rdzeń, odstępnik i ligand. Czasami zawiera również jon metalu, który jest sprzężony z ligandem. Najkorzystniejszą fazą stałą dla fazy stacjonarnej w tej technice jest żel agarozowy, ponieważ można go łatwo dozować, aby wypełnić i wypełnić kolumnę złożami żywicy o dowolnym rozmiarze i jest wystarczająco duży, aby biocząsteczki mogły swobodnie przepływać do i przez kulki. Ligandy mogą kowalencyjnie przyłączać się do kuleczek polimerowych na różne sposoby. Najpopularniejszymi związkami dystansowymi są bromocyjan, epoksyd, epoksyd z kwasem C6 i diamina. Z drugiej strony, ligand, który możemy zastosować, różni się w zależności od celu, np. przeciwciało-antygen, jony żelaza lub glinu-fosfoproteiny, awidyna-biotyna, glutation-GST, białka znakowane chelatorem-His itp.
Jaka jest różnica między filtracją żelową a chromatografią powinowactwa?
Chromatografia to ważna technika analityczna. Chromatografia żelowa i chromatografia powinowactwa to dwie ważne odmiany chromatografii. Kluczowa różnica między filtracją żelową a chromatografią powinowactwa polega na tym, że chromatografia żelowa zależy od różnic w masie cząsteczkowej lub wielkości próbki analitu, podczas gdy chromatografia powinowactwa zależy od powinowactwa analitu do unieruchomionego ligandu.
Podsumowanie – filtracja żelowa a chromatografia powinowactwa
Istnieją różne rodzaje technik chromatograficznych w zależności od ich zastosowania i charakteru próbki analitu. Filtracja żelowa i chromatografia powinowactwa to dwa tego typu techniki. Kluczowa różnica między filtracją żelową a chromatografią powinowactwa polega na tym, że chromatografia żelowa zależy od różnic w masie cząsteczkowej lub wielkości próbki analitu, podczas gdy chromatografia powinowactwa zależy od powinowactwa analitu do unieruchomionego ligandu.
