Kluczowa różnica między chromatografią powinowactwa a chromatografią jonowymienną polega na tym, że możemy użyć chromatografii powinowactwa do oddzielenia naładowanych lub nienaładowanych składników w mieszaninie, podczas gdy możemy użyć chromatografii jonowymiennej do oddzielenia naładowanych składników w mieszaninie.
Chromatografia to technika, której możemy użyć do oddzielenia pożądanych składników w mieszaninie. Istnieją różne typy, takie jak chromatografia cieczowa, chromatografia gazowa itp. Chromatografia powinowactwa i chromatografia jonowymienna to dwie podkategorie chromatografii cieczowej. Również w tych technikach są dwie fazy. Mianowicie są to faza stacjonarna i faza ruchoma. Celem tych technik jest oddzielenie składników, w zależności od wiązania składników, w fazie ruchomej na powierzchni fazy stacjonarnej.
Co to jest chromatografia powinowactwa?
Chromatografia powinowactwa to technika biochemiczna, której używamy do rozdzielania składników w mieszaninie w zależności od interakcji między tymi składnikami.
Interakcje, których używamy w tym przypadku, obejmują:
- Interakcje antygen-przeciwciało
- Interakcje enzym-substrat
- Interakcje receptor-ligand
- Interakcje białko-kwas nukleinowy
W tej technice wykorzystujemy właściwości molekularne cząsteczek w tej technice rozdzielania. Tutaj umożliwiamy pożądanemu związkowi interakcję z fazą stacjonarną poprzez wiązania wodorowe, oddziaływania jonowe, mostki dwusiarczkowe, oddziaływania hydrofobowe itp. Cząsteczki, które nie oddziałują z fazą stacjonarną, będą eluować jako pierwsze. W ten sposób możemy oddzielić go od mieszanki. Pożądany związek pozostanie przyłączony do fazy stacjonarnej. Dlatego możemy go oddzielić za pomocą rozpuszczalnika eluującego i sprawić, by eluował, aby go również oddzielić.
Rysunek 01: Kolumna chromatograficzna
Chromatografia powinowactwa jest przydatna do oczyszczania i zatężania substancji z mieszaniny przy użyciu roztworu buforowego. Jest również pomocny w redukcji niepożądanych substancji w mieszaninie. Rozważając aparat, którego używamy do tego procesu, powinniśmy użyć kolumny wypełnionej naszą fazą stacjonarną. Następnie należy załadować fazę ruchomą zawierającą biomolekuły, które zamierzamy oddzielić. Następnie pozwól im związać się z fazą stacjonarną. Następnie, używając buforu myjącego, możemy oddzielić biocząsteczki niedocelowe, ale cząsteczki docelowe powinny mieć wysokie powinowactwo do fazy stacjonarnej, aby proces separacji zakończył się sukcesem.
Co to jest chromatografia jonowymienna?
Chromatografia jonowa to forma chromatografii cieczowej, w której możemy analizować substancje jonowe. Często używamy go do analizy anionów i kationów nieorganicznych (tj. anionów chlorkowych i azotanowych oraz kationów potasu, sodu). Chociaż jest to mniej powszechne, możemy również analizować jony organiczne. Co więcej, możemy wykorzystać tę technikę do oczyszczania białek, ponieważ białka są naładowane cząsteczkami przy określonych wartościach pH. Tutaj używamy stałej fazy stacjonarnej, do której mogą przyczepiać się naładowane cząstki. Na przykład jako nośnik stały możemy zastosować żywiczne kopolimery polistyren-diwinylobenzen.
Rysunek 02: Fazy chromatografii jonowymiennej
Aby wyjaśnić to dokładniej, faza stacjonarna zawiera utrwalone jony, takie jak aniony siarczanowe lub kationy amin czwartorzędowych. Każdy z nich powinien kojarzyć się z przeciwjonem (jonem o przeciwnym ładunku), jeśli mamy zachować neutralność tego układu. Tutaj, jeśli przeciwjonem jest kation, wtedy nazywamy układ żywicą kationowymienną. Ale jeśli przeciwjonem jest anion, układem jest żywica anionowymienna.
Istnieje pięć głównych faz procesu wymiany jonowej;
- Początkowy etap
- Adsorpcja celu
- Rozpoczęcie elucji
- Koniec elucji
- Regeneracja
Jaka jest różnica między chromatografią powinowactwa a chromatografią jonowymienną?
Chromatografia powinowactwa to technika biochemiczna, której używamy do rozdzielania składników w mieszaninie w zależności od interakcji między tymi składnikami, podczas gdy chromatografia jonowa jest formą chromatografii cieczowej, w której możemy analizować substancje jonowe. Dlatego główna różnica między chromatografią powinowactwa a chromatografią jonowymienną polega na tym, że możemy stosować chromatografię jonowymienną tylko do oddzielania substancji jonowych, podczas gdy chromatografia powinowactwa jest w stanie oddzielić zarówno cząstki naładowane, jak i nienaładowane. Rozważając zasadę działania, różnica między chromatografią powinowactwa a chromatografią jonowymienną polega na tym, że chromatografia powinowactwa przebiega ze względu na fakt, że cząsteczki docelowe mają wysokie powinowactwo do fazy stacjonarnej. Jednak w przypadku chromatografii jonowymiennej cząsteczki docelowe mają ładunek przeciwny do ładunku powierzchni fazy stacjonarnej.
Poniższa infografika przedstawia różnicę między chromatografią powinowactwa i jonowymienną jako porównanie obok siebie.
Podsumowanie – Chromatografia powinowactwa a jonowymienna
Podsumowując, chromatografia powinowactwa i jonowymienna to dwie formy technik chromatografii cieczowej. Kluczowa różnica między chromatografią powinowactwa a chromatografią jonowymienną polega na tym, że możemy użyć chromatografii powinowactwa do oddzielenia naładowanych lub nienaładowanych składników w mieszaninie, podczas gdy możemy użyć chromatografii jonowymiennej do oddzielenia naładowanych składników w mieszaninie.
