Kluczowa różnica – immunofluorescencja a immunohistochemia
Diagnostyka chorób, która wykorzystuje metody biologii molekularnej, stała się wschodzącym obszarem technologii laboratorium klinicznego. Obejmuje wszystkie testy i metody identyfikacji choroby i zrozumienia przyczyny choroby poprzez analizę DNA, RNA lub wyrażanych białek w organizmie. Szybkie postępy w diagnostyce molekularnej umożliwiły prowadzenie badań podstawowych nad chorobami zakaźnymi i niezakaźnymi. Są one wykorzystywane do określania zmian w sekwencji lub poziomach ekspresji w kluczowych genach lub białkach zaangażowanych w chorobę. Immunofluorescencja (IF) i immunohistochemia (IHC) to dwie takie szeroko stosowane techniki w biologii raka. IF jest rodzajem IHC, w którym do analizy przeciwciał monoklonalnych i poliklonalnych stosuje się metodę wykrywania fluorescencyjnego, podczas gdy IHC wykorzystuje metody chemiczne do wykrywania przeciwciał monoklonalnych i poliklonalnych. To jest kluczowa różnica między IF a IHC.
Co to jest immunofluorescencja (IF)?
Immunofluorescencja to technika wykrywania, w której przeciwciała używane w teście są znakowane barwnikami fluorescencyjnymi lub białkami fluorescencyjnymi do celów wykrywania. Znakowane przeciwciała drugorzędowe mogą dawać niepożądane sygnały tła; dlatego technika IF opiera się na znakowaniu samego przeciwciała pierwszorzędowego w chwili obecnej w celu uniknięcia niepożądanych sygnałów podczas wykrywania. Dzięki tej technice zapobiega się nieswoistemu wiązaniu między pierwszorzędowym i drugorzędowym przeciwciałem i jest ono szybsze, ponieważ nie obejmuje etapu wtórnej inkubacji. Poprawia się również jakość danych.
Rysunek 01: Podwójne barwienie immunofluorescencyjne dla BrdU, NeuN i GFAP
Fluorochromy lub barwniki fluorescencyjne to związki, które mogą pochłaniać promieniowanie, najlepiej wzbudzone promieniowanie ultrafioletowe. Gdy cząstki osiągają stan podstawowy ze stanu wzbudzonego, emitują promieniowanie, które jest wychwytywane i wykrywane przez detektor, tworząc widmo. Bardzo ważne jest, aby znacznik fluorescencyjny był kompatybilny i stabilny dla konkretnej reakcji i powinien być odpowiednio sprzężony z przeciwciałem w celu uzyskania dokładnych wyników. Jednym z najczęściej stosowanych fluorochromów jest izotiocyjanian fluoresceiny (FITC), który ma zielony kolor, z pikami absorpcji i emisji o długości fali odpowiednio 490 nm i 520 nm. Rodamina, inny środek stosowany w IF, ma kolor czerwony i ma wyraźną długość fali absorpcji i emisji 553 nm i 627 nm.
Co to jest immunohistochemia (IHC)?
IHC to molekularna metoda testowania stosowana w celu identyfikacji i potwierdzenia obecności antygenu w komórce docelowej. Komórką docelową może być cząstka zakaźna, patogen drobnoustrojowy lub złośliwa komórka nowotworowa. IHC wykorzystuje przeciwciała monoklonalne i poliklonalne do określenia obecności antygenów obecnych na powierzchni komórek docelowych. Technika opiera się na wiązaniu antygen-przeciwciało. Z tymi przeciwciałami sprzężony jest marker wykrywający w celu wykrycia obecności lub nieobecności określonego antygenu. Te markery mogą być markerami chemicznymi, takimi jak enzymy, przeciwciała znakowane fluorescencyjnie lub przeciwciała znakowane radioaktywnie.
Rysunek 02: Plasterek mózgu myszy barwiony metodą immunohistochemiczną
Najpopularniejszym zastosowaniem IHC jest biologia komórek rakowych w celu identyfikacji obecności nowotworów złośliwych, ale jest ona również wykorzystywana do wykrywania chorób zakaźnych.
Jakie są podobieństwa między immunofluorescencją a immunohistochemią?
- Immunofluorescencja i immunohistochemia odbywają się w warunkach in vitro.
- Obie techniki bazują na antygenie-przeciwciało
- Oba są bardzo szybkimi technikami.
- Wyniki technik są powtarzalne.
- Oba mają lepszą jakość danych.
- Te techniki stosowane w diagnostyce chorób nowotworowych i zakaźnych.
Jaka jest różnica między immunofluorescencją a immunohistochemią?
Immunofluorescencja a immunohistochemia |
|
| IF to technika wykrywania, w której przeciwciała używane w teście są znakowane przy użyciu barwników fluorescencyjnych lub białek fluorescencyjnych do wykrywania. | IHC to technika wykrywania, w której przeciwciała używane w teście są znakowane przy użyciu substancji chemicznych lub pierwiastków radioaktywnych do wykrywania. |
| Dokładność | |
| Dokładność jest wyższa w technice IF w porównaniu z IHC. | Dokładność jest niższa w IHC. |
| Specyfika | |
| IF jest bardziej szczegółowe. | IHC jest mniej szczegółowe. |
Podsumowanie – Immunofluorescencja a immunohistochemia
Mechanizmy molekularne spowodowały wiele zmian w medycynie, dając początek zaawansowanym metodom badań molekularnych, które przyniosły rewolucje w dziedzinie diagnostyki. Wynalazki te doprowadziły do szybkiej i dokładnej identyfikacji i potwierdzenia choroby, umożliwiając w ten sposób skuteczne podawanie i produkcję leków. Techniki te są również wykorzystywane w farmakologii w celu znalezienia celów leków i potwierdzenia właściwości farmakokinetycznych leku podczas metabolizmu leku. IF i IHC to dwie metody diagnostyczne, które opierają się na koncepcji wiązania antygenu i przeciwciała, chociaż sposób wykrywania w obu technikach różni się. IF wykorzystuje zasadę fluorescencji do wykrywania antygenu, a IHC wykorzystuje koncepcję koniugacji chemicznej do wykrywania antygenu. To jest różnica między IF a IHC.
Pobierz wersję PDF immunofluorescencji a immunohistochemia
Możesz pobrać wersję PDF tego artykułu i używać jej do celów offline zgodnie z notatką cytowania. Proszę pobrać wersję PDF tutaj Różnica między immunofluorescencją a immunohistochemią.
