Kluczowa różnica między bezpośrednią i pośrednią immunofluorescencją polega na tym, że immunofluorescencja bezpośrednia wykorzystuje pojedyncze przeciwciało, które działa przeciwko interesującemu obiektowi, podczas gdy immunofluorescencja pośrednia wykorzystuje dwa przeciwciała do oznaczenia obiektu będącego przedmiotem zainteresowania.
Immunofluorescencja lub obrazowanie komórek to technika stosowana do znakowania określonego antygenu docelowego fluoroforem. Tutaj fluorofor jest fluorescencyjnym związkiem chemicznym, który może ponownie emitować światło po wzbudzeniu światłem. Gdy fluorofor wiąże się z antygenem docelowym, umożliwia wykrycie cząsteczki docelowej w próbce. Aby to dokładniej opisać, gdy antygen wiąże się ze specyficznym przeciwciałem, można go sprzęgać z fluoroforami. Dzięki temu łatwo jest wykryć obecność docelowego antygenu w próbce podczas obserwacji pod mikroskopem fluorescencyjnym.
Poza tym istnieją dwa rodzaje immunofluorescencji; bezpośrednia i pośrednia immunofluorescencja. Różnica między immunofluorescencją bezpośrednią i pośrednią polega głównie na liczbie użytych przeciwciał i koniugacji fluoroforu. Oznacza to, że w immunofluorescencji bezpośredniej fluorofor jest bezpośrednio sprzężony z przeciwciałem pierwszorzędowym, podczas gdy w immunofluorescencji pośredniej fluorofor jest sprzężony z przeciwciałem drugorzędowym.
Co to jest bezpośrednia immunofluorescencja?
Immunofluorescencja wykorzystuje przeciwciała do wykrywania określonych antygenów docelowych. Immunofluorescencja bezpośrednia jest jednym z dwóch rodzajów immunofluorescencji. W bezpośredniej immunofluorescencji zaangażowane jest pojedyncze przeciwciało (pierwotne przeciwciało), a fluorofor bezpośrednio sprzęga się z pierwotnym przeciwciałem. Po związaniu przeciwciała z docelowym antygenem fluorofor emituje fluorescencję, którą można wykryć za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego.
Rysunek 01: Bezpośrednia immunofluorescencja
Jednak bezpośrednia immunofluorescencja jest kosztowną metodą, ponieważ pierwotne skoniugowane przeciwciała są kosztowne w porównaniu z wtórnymi przeciwciałami. Niemniej jednak nie wiąże się to z dodatkowym krokiem, a więc krótszą techniką. Ponadto wiązania niespecyficzne ulegają zmniejszeniu w bezpośredniej immunofluorescencji. W związku z tym reaktywność krzyżowa gatunków jest niska. Ale w wykrywaniu czułość immunofluorescencji bezpośredniej jest słaba w porównaniu z immunofluorescencją pośrednią.
Co to jest immunofluorescencja pośrednia?
Immunofluorescencja pośrednia to drugi rodzaj immunofluorescencji, który obejmuje dwa typy przeciwciał, takie jak przeciwciała pierwszorzędowe i drugorzędowe w znakowaniu docelowego antygenu. W tej metodzie fluorofor sprzęga się z przeciwciałem drugorzędowym. Dlatego ta technika obejmuje dodatkowy krok.
Rysunek 02: Immunofluorescencja
Jednak czułość tej metody jest wysoka, ponieważ kilka fluoroforów może być sprzężonych z przeciwciałami wtórnymi, co ułatwia wykrywanie. Ponadto immunofluorescencja pośrednia jest tańsza ze względu na fakt, że koniugacja przeciwciał wtórnych jest tańsza i łatwiejsza. W porównaniu z immunofluorescencją bezpośrednią, reaktywność krzyżowa gatunków jest wysoka w metodzie pośredniej.
Jakie są podobieństwa między bezpośrednią i pośrednią immunofluorescencją?
- Są to dwa rodzaje technik immunofluorescencji.
- Pierwotne przeciwciała i fluorofor są wykorzystywane w obu metodach.
- Ponadto reakcja antygen-przeciwciało zachodzi w obu metodach.
- Ponadto, zarówno bezpośrednia, jak i pośrednia immunofluorescencja wykorzystują mikroskop fluorescencyjny do wykrywania antygenu.
Jaka jest różnica między bezpośrednią a pośrednią immunofluorescencją?
Immunofluorescencja może być bezpośrednia lub pośrednia oparta na koniugacji fluoroforu z zastosowanymi przeciwciałami. W immunofluorescencji bezpośredniej fluorofor sprzęga się z przeciwciałem pierwotnym, które jest pojedynczym przeciwciałem wykorzystywanym w tej technice. W przeciwieństwie do tego, w immunofluorescencji pośredniej fluorofor sprzęga się z przeciwciałem drugorzędowym, które jest jednym z dwóch typów przeciwciał, które są zaangażowane w tę technikę. W związku z tym główną różnicą między immunofluorescencją bezpośrednią i pośrednią jest typ przeciwciała skoniugowanego z fluoroforem.
Poniższa infografika zawiera porównanie różnic między immunofluorescencją bezpośrednią i pośrednią.
Podsumowanie – bezpośrednia i pośrednia immunofluorescencja
Immunofluorescencja to technika stosowana do wykrywania obecności określonych antygenów w próbce. Ta technika wykorzystuje specyficzne przeciwciała. Dlatego w tym przypadku przeciwciała sprzęgają się z fluoroforami w celu ich wykrycia za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego. Ponadto istnieją dwa rodzaje immunofluorescencji, a mianowicie bezpośrednia i pośrednia immunofluorescencja. Bezpośrednia immunofluorescencja obejmuje pojedyncze przeciwciało i fluorofor bezpośrednio sprzężony z tym przeciwciałem. Pośrednia immunofluorescencja obejmuje dwa przeciwciała; pierwszorzędowe i drugorzędowe oraz fluorofor sprzężony z drugorzędowym przeciwciałem. Ponieważ kilka przeciwciał drugorzędowych może wiązać się z przeciwciałem pierwszorzędowym, a kilka fluoroforów może łączyć się z przeciwciałami drugorzędowymi, immunofluorescencja pośrednia jest bardziej czułą metodą niż metoda bezpośrednia. Ponadto metoda pośrednia jest tańsza niż metoda bezpośrednia. Tak więc jest to różnica między immunofluorescencją bezpośrednią i pośrednią.
