Kluczowa różnica – hybrydyzacja in situ a immunohistochemia
Diagnostyka nowotworów i chorób zakaźnych jest popularnym trendem, w którym nowe techniki oparte na proteomice i genomice są wykorzystywane w celu identyfikacji nowotworów lub komórek zakaźnych, ich proliferacji i miejsc rozwoju komórek oraz analizy genetycznej podstawy większości zakaźnych i Choroby niezakaźne. Zaowocuje to dokładnym przetwarzaniem i projektowaniem leków oraz opracowaniem dostosowanych terapii chorób. Hybrydyzacja in situ (ISH) i immunohistochemia (IHC) to dwie takie szeroko stosowane techniki w biologii raka, a kluczowa różnica między hybrydyzacją in situ a immunochemią polega na cząsteczkach stosowanych w procedurze analizy. W ISH do oznaczeń diagnostycznych stosuje się sondy kwasu nukleinowego, podczas gdy w IHC do oznaczeń diagnostycznych stosuje się przeciwciała monoklonalne i poliklonalne.
Co to jest hybrydyzacja in situ (ISH)?
Hybrydyzacja in situ to technika hybrydyzacji kwasów nukleinowych wykonywana bezpośrednio na części lub skrawku tkanki, w całej tkance lub w komórkach. Technika ta opiera się na teorii komplementarnego parowania zasad Watsona Cricka, w wyniku czego powstają hybrydy DNA-DNA lub hybrydy DNA-RNA, które mogą wykrywać zmutowane geny lub identyfikować wymagany gen będący przedmiotem zainteresowania. Sekwencje jednoniciowego DNA, dwuniciowe sekwencje DNA, jednoniciowe sekwencje RNA lub syntetyczne sekwencje oligonukleotydowe są stosowane jako sondy podczas techniki hybrydyzacji, a sondy te są znakowane radioaktywnym fosforem na jego końcu 5' do procedur identyfikacji po autoradiografii lub znakowane przy użyciu barwników fluorescencyjnych. Dostępne są różne rodzaje technik ISH w zależności od typu użytej sondy i zastosowanej techniki wizualizacji.
Rysunek 01: Hybrydyzacja fluorescencyjna in situ
Istnieje wiele zastosowań ISH, głównie w diagnostyce molekularnej chorób zakaźnych w celu identyfikacji obecności patogenów i potwierdzenia patogenu za pomocą diagnostyki molekularnej. Jest również stosowany w dziedzinie biologii rozwoju, kariotypowania i analizy filogenetycznej oraz fizycznego mapowania chromosomów.
Co to jest immunohistochemia (IHC)?
W technice IHC główną analizowaną cząsteczką jest antygen. Podczas IHC przeciwciała monoklonalne i poliklonalne są wykorzystywane do określenia obecności antygenów po infekcji lub stanie proliferacji komórek nowotworowych. Technika ta opiera się na wiązaniu antygen-przeciwciało, a do tej techniki stosuje się znaczniki enzymatyczne; jednym z takich zastosowań jest test ELISA (test immunoenzymatyczny). Markerami mogą być również przeciwciała znakowane fluorescencyjnie lub przeciwciała znakowane radioaktywnie.
Rysunek 02: Immunohistochemia
IHC jest szeroko stosowany do wykrywania komórek rakowych. Procedury diagnostyczne celują w antygeny obecne na komórkach nowotworowych, aby zidentyfikować i scharakteryzować nowotwór. Ta sama procedura jest stosowana do diagnozowania czynników zakaźnych. Przeciwciała monoklonalne i poliklonalne są również wykorzystywane do analizy różnych produktów genów poprzez umożliwienie reakcji wiązania przeciwciało-antygen pomiędzy pożądanym białkiem a podawanym przeciwciałem syntetycznym.
Jakie są podobieństwa między hybrydyzacją in situ a immunohistochemią?
- ISH i IHC to wysoce specyficzne reakcje.
- Obie techniki są bardzo dokładne.
- Obie techniki mogą być stosowane w diagnostyce chorób nowotworowych i zakaźnych.
- Te techniki są wykonywane w sterylnych środowiskach in vitro.
- Oba są szybkimi technikami, które zapewniają powtarzalne wyniki.
- ISH i IHC wykorzystują metody wykrywania, takie jak radioznakowanie i techniki fluorescencyjne.
Jaka jest różnica między hybrydyzacją in situ a immunohistochemią?
Hybrydyzacja in situ a immunohistochemia |
|
| ISH to technika hybrydyzacji kwasów nukleinowych, która jest wykonywana bezpośrednio na części lub skrawku tkanki lub na całej tkance. | IHC to technika, w której przeciwciała monoklonalne i poliklonalne są wykorzystywane do określenia obecności antygenów, które są specjalnymi markerami białkowymi umieszczanymi na powierzchni komórek. |
| Typ analizowanych biocząsteczek | |
| ISH analizuje kwasy nukleinowe. | IHC analizuje białka-antygeny. |
| Podstawy reakcji biochemicznych | |
| W tej technice występuje komplementarne parowanie zasad między DNA-DNA lub DNA-RNA. | Interakcje antygen-przeciwciało są zaangażowane w immunohistochemię. |
| Metody wykrywania oparte na enzymach | |
| Metody wykrywania połączone z enzymami nie mogą być używane w ISH. | Metody wykrywania powiązane z enzymami mogą być stosowane w IHC. |
Podsumowanie – Hybrydyzacja in situ a immunohistochemia
Diagnostyka molekularna to szybkie i potwierdzające metody, które można wykorzystać do identyfikacji chorób niezakaźnych, takich jak rak lub choroby zakaźne, takie jak HIV lub gruźlica, w oparciu o markery molekularne obecne na komórkach, które prowadzą do manifestacji choroby. Markery molekularne mogą być obecne w postaci eksprymowanych białek lub na poziomie genetycznym, na podstawie którego wprowadza się różne nowe techniki w celu zwiększenia wydajności i są mniej pracochłonne, chociaż z tymi technikami wiążą się wysokie koszty. Tak więc ISH zależy od tworzenia hybryd DNA-DNA lub DNA-RNA, a IHC zależy od specyficznych reakcji między przeciwciałem a antygenem. To jest różnica między hybrydyzacją in situ.
Pobierz wersję PDF hybrydyzacji in situ a immunohistochemii
Możesz pobrać wersję PDF tego artykułu i używać jej do celów offline zgodnie z notatką cytowania. Proszę pobrać wersję PDF tutaj Różnica między hybrydyzacją in situ a immunohistochemią.
