Kluczowa różnica między barwieniem Coomassie a srebrem polega na tym, że barwienie Coomassie jest techniką barwienia białek, która wykorzystuje barwienie brylantowym błękitem Coomassie, podczas gdy barwienie Sliver jest techniką barwienia białek przy użyciu barwienia srebrem.
Separacja i identyfikacja białek to kluczowe etapy analizy proteomu. Po elektroforezie żelowej wymagają one charakteryzacji białek o wysokiej rozdzielczości. Istnieje wiele technik barwienia, które obejmują różne barwienia, takie jak barwniki anionowe (błękit brylantowy Coomassie), kationy metali (imidazol-cynk), barwienie srebrem i barwniki fluorescencyjne itp. Czasami można również użyć sond radioaktywnych. Wybór techniki barwienia zależy od prostoty, dostępności sprzętu do obrazowania w laboratorium itp.
Co to jest barwienie Coomassie?
Barwienie Coomassie to technika barwienia białek, która wykorzystuje brylantowy błękit Coomassie. Jest to ogólnie nazywane techniką błękitu Coomassie. Brylantowy błękit Coomassie jest najpopularniejszym anionowym barwnikiem białkowym. Barwnik ten zwykle barwi prawie wszystkie białka z dobrą liniowością ilościową przy średniej czułości. Błyszczący błękit Coomassie wiąże się niespecyficznie z prawie wszystkimi białkami. Istnieją dwa różne warianty brylantowego błękitu Coomassie: R-250 i G-250. R-250 oferuje krótsze czasy barwienia, podczas gdy G-250 jest dostępny w bardziej wrażliwych i przyjaznych dla środowiska formułach.
Rysunek 01: Barwienie Coomassie
Barwniki Coomassie są bardzo popularne w badaniach spektrometrii masowej i badaniach identyfikacji białek. Co więcej, biologicznie bezpieczny barwnik Coomassie to nieszkodliwy preparat błękitu Coomassie G-250, który jest obecnie dostępny na rynku. Zaletą tego preparatu jest to, że do spłukiwania i odplamiania wymaga jedynie wody. Bio-bezpieczne barwienie Coomassie zapewnia czułość równoważną konwencjonalnemu barwnikowi Coomassie Blue G-250, ale lepszą niż barwnik Coomassie R-250. Ponadto ma prostszy i szybszy protokół barwienia niż konwencjonalny błękit Coomassie G-250. Wadą barwienia błękitem Coomassie jest to, że jest mniej czułe w porównaniu z barwieniem srebrem. Barwienie błękitem Coomassie jest około 50-krotnie mniej czułe niż barwienie srebrem. Jednak ze względu na swoją prostotę w oprawie jest preferowany w wielu badaniach.
Co to jest barwienie srebrem?
Barwienie srebrem to technika barwienia białek, która wykorzystuje barwienie srebrem. Barwienie srebrem służy do barwienia żeli agarozowych i poliakrylamidowych. Barwienie srebrem białek w żelach agarozowych zostało po raz pierwszy opracowane w 1973 roku przez Kerenyi i Gallyasa. Później został przystosowany do białek w żelach poliakrylamidowych, które są wykorzystywane w SDS-PAGE. Obecnie barwienie srebrem stosuje się również do barwienia DNA lub RNA. W celu zabarwienia żeli, żele inkubuje się tą metodą z roztworem azotanu srebra. Barwienie srebrem barwi miejsca, w których obecne są białka, od brązowego do czarnego.
Rysunek 02: Barwienie srebra
Intensywność barwienia srebrem zależy od pierwotnej struktury białka. Ponadto czystość stosowanych naczyń i odczynników może również wpływać na jakość barwienia srebrem. Jednak wadą barwienia srebrem jest to, że nie jest w stanie wykryć wszystkich białek, zwłaszcza glikoprotein i białek z dużymi zmodyfikowanymi grupami przyłączonymi do ich łańcuchów bocznych.
Jakie są podobieństwa między Coomassie a barwieniem srebrem?
- Barwienie Coomassie i srebrem to dwie techniki stosowane do barwienia białek.
- Mogą barwić zarówno białka, jak i DNA.
- Obie techniki barwienia mają wady.
- Te techniki mają podobne etapy, takie jak utrwalanie, barwienie i odbarwianie.
Jaka jest różnica między barwieniem Coomassie a srebrem?
Barwienie Coomassie to technika barwienia białek wykorzystująca barwienie błękitem Coomassie, podczas gdy barwienie Sliver to technika barwienia białek wykorzystująca barwienie srebrem. Jest to zatem kluczowa różnica między barwieniem Coomassie a srebrem. Ponadto barwienie Coomassie jest mniej wrażliwe niż barwienie srebrem.
Poniższa infografika przedstawia różnice między barwieniem Coomassie a srebrem w formie tabelarycznej do porównania.
Podsumowanie – Coomassie kontra barwienie srebra
Aby zwizualizować białka, można przeprowadzić reakcję chemiczną wiążącą barwnik lub barwę specyficzną dla białka. Nazywa się to barwieniem białek. Barwienie Coomassie i srebrem to dwie techniki stosowane do barwienia białek. W technice barwienia Coomassie stosuje się brylantową błękitną barwienie Coomassie, podczas gdy barwienie Sliver wykorzystuje bejcę srebrną. Jest to więc kluczowa różnica między barwieniem Coomassie a srebrem.
