Kluczowa różnica między BCA a testem Bradford polega na tym, że test BCA jest czasochłonny i mniej dokładny, podczas gdy test Bradforda jest szybki i dokładny.
BCA i test Bradforda to dwie metody oznaczania stężenia białka. Te dwa testy mają różne zasady testu i różnice w ich dokładności.
Co to jest test BCA?
Test BCA lub test kwasu bicynchoninowego jest testem biochemicznym przydatnym do określania całkowitego stężenia białka w roztworze. Metoda ta jest również nazywana testem Smitha na cześć jego wynalazcy, Paula K. Smitha. Ta metoda analityczna wykazuje podobieństwa do testu białkowego Lowry'ego, testu białkowego Bradforda czy odczynnika biuretowego. Całkowite stężenie białka w danej próbce możemy obserwować poprzez zmianę koloru roztworu próbki, który zmienia się z zielonego na fioletowy. Ta zmiana koloru następuje proporcjonalnie do zawartości białka. Następnie możemy użyć techniki kolorymetrycznej do analizy intensywności koloru i zawartości białka w próbce.
BCA Metoda szacowania białka
Rozważając mechanizm oznaczania BCA, typowy roztwór BCA zawiera silnie alkaliczny roztwór o pH około 11,25, a składniki tego roztworu obejmują kwas bicynchoninowy, węglan sodu, wodorowęglan sodu, winian sodu i pentahydrat siarczanu miedzi(II). Ten test zależy przede wszystkim od dwóch reakcji chemicznych: redukcji miedzi(II) do miedzi(I) przez wiązania peptydowe w białku i chelatacji dwóch cząsteczek kwasu bicynchoninowego jonem miedzi(I), w wyniku czego powstaje purpurowo zabarwiony kompleks, który może absorbują światło o długości fali 562 nm. W pierwszej reakcji ilość miedzi(II) zredukowana przez wiązania peptydowe jest proporcjonalna do ilości białka w próbce.
Co to jest test Bradforda?
Test Bradforda to spektroskopowa metoda analityczna przydatna do pomiaru stężenia białka w roztworze. Ta metoda została opracowana przez Marion M. Bradford w 1976 roku i jest stosunkowo szybka i dokładna.
Reakcja barwna białka i odczynnika Bradforda
Możemy użyć tej metody do określenia stężenia białka w próbce. Reakcja chemiczna, która zachodzi w próbce podczas tego testu, zależy wyłącznie od składu aminokwasowego białka w próbce.
Metoda Bradforda Szacowania Białka
Rozważając metodę tego testu, jest to kolorymetryczny test białka oparty na przesunięciu absorbancji barwnika o nazwie Coomassie Brilliant Blue G-250. Ogólnie barwnik ten występuje w trzech formach: anionowej (niebieskiej), neutralnej (zielonej) i kationowej (czerwonej). Dlatego w warunkach kwaśnych barwnik zmienia kolor z czerwonego na niebieski. Dzieje się tak z powodu wiązania białka z barwnikiem. Natomiast jeśli nie ma białka, które mogłoby się związać z barwnikiem, zmiana koloru nie pojawia się, roztwór nabiera czerwono-brązowego koloru. Barwnik ten jest zdolny do tworzenia silnego, niekowalencyjnego kompleksu z grupą karboksylową białka poprzez siły Van der Waala i przyciąganie elektrostatyczne.
Jaka jest różnica między testem BCA a testem Bradforda?
BCA i test Bradforda to dwie metody oznaczania stężenia białka. Te dwa testy mają różne zasady testu i różnice w ich dokładności. Kluczową różnicą między BCA a testem Bradford jest to, że test BCA jest czasochłonny i mniej dokładny, podczas gdy test Bradforda jest szybki i dokładny.
Poniższa infografika podsumowuje różnice między testem BCA i Bradford w formie tabelarycznej.
Podsumowanie – BCA vs Bradford Assay
Test BCA lub test kwasu bicynchoninowego jest testem biochemicznym przydatnym do określania całkowitego stężenia białka w roztworze. Test Bradforda jest spektroskopową metodą analityczną przydatną w pomiarze stężenia białka w roztworze. Kluczową różnicą między BCA a testem Bradford jest to, że BCA jest czasochłonne i mniej dokładne, podczas gdy test Bradford jest szybki i dokładny.
