Kluczowa różnica – RNASE A vs RNASE H
Rybonukleazy to nukleazy, które specyficznie rozkładają RNA na mniejsze jednostki. Można je podzielić na dwie kategorie; endorybonukleazy i egzorybonukleazy. Endorybonukleaza to endonukleaza, która może degradować jednoniciowy lub dwuniciowy RNA. Rozcina wiązania fosfodiestrowe w łańcuchu polinukleotydowym RNA. Przykładami są RNaza A, RNaza III, RNaza T1, RNaza P i RNaza H. Egzorybonukleaza jest egzonukleazą, która degraduje RNA poprzez usunięcie końcowych nukleotydów z 5' lub 3' końca cząsteczki RNA. Przykładami są RNaza R, RNaza II, RNaza D i RNaza PH. Kluczowa różnica między RNASE A i RNASE H polega na tym, że RNaza A jest rybonukleazą trzustkową, która specyficznie rozkłada jednoniciowy RNA na mniejsze składniki, podczas gdy RNaza H jest nieswoistym enzymem, który rozcina RNA w hybrydzie RNA-DNA na mniejsze jednostki poprzez mechanizm hydrolityczny.
Co to jest RNASE A?
RNaza A jest rybonukleazą trzustkową, która specyficznie rozszczepia niesparowane reszty cytozyny i uracylu na końcu 3’ jednoniciowego RNA. RNaza H działa przy wyższym stężeniu soli (stężenie 0,3M lub wyższe NaCl). Reakcja hydrolityczna jest dwuetapowa. Tworzy produkt fosforylowany 3’ poprzez cykliczny związek pośredni monofosforanu 2’, 3’. Chociaż jest specyficzny dla jednoniciowego RNA przy wyższym stężeniu soli, może również degradować dwuniciowy RNA i RNA w hybrydzie RNA-DNA przy niższym stężeniu NaCl (niższym niż 0,3 M NaCl).
Bruce Merrifield po raz pierwszy zsyntetyzował ten enzym. RNaza A jest bardzo popularnym enzymem w badaniach molekularnych. Bydlęca RNaza trzustkowa A jest przykładem RNazy A. Jest to jeden z najtwardszych enzymów stosowanych w laboratorium. Enzym ten do swojej aktywności nie potrzebuje kofaktora. Jest to enzym wysoce termostabilny. RNaza A jest pierwszym enzymem i trzecim białkiem, w którym wykryto prawidłową sekwencję aminokwasową. Enzym ten jest bardzo mały z 124 aminokwasami i masą cząsteczkową 12600da. I ma cztery reszty histydyny (His 12 i His 119, które biorą udział w reakcji katalitycznej).
Rysunek 01: RNaza A
RNazę A można wyizolować przez gotowanie surowej próbki. Kiedy się zagotuje, wszystkie inne enzymy degradują pozostałą RNazę A. RNaza A jest niezwykle stabilnym enzymem. Enzym ten hamuje za pomocą białka inhibitora rybonukleazy, kompleksów metali ciężkich i wanadanu urydyny.
Co to jest RNaza H?
RNaza H jest nieswoistym enzymem rybonukleazy, który może degradować RNA w hybrydzie RNA-DNA poprzez reakcję hydrolityczną. RNaza H rozcina 3’- wiązanie O-P RNA w hybrydzie RNA-DNA. Docelowo produkuje produkty zakończone fosforanami 3’OH i 5’. W replikacji DNA odgrywa kluczową rolę, usuwając starter RNA po utworzeniu nowych nici DNA. W warunkach laboratoryjnych specyficznie degraduje RNA w hybrydzie RNA-DNA, ale nie DNA i niezhybrydyzowane RNA. I ten enzym jest zwykle używany do zniszczenia matrycy RNA po utworzeniu pierwszej komplementarnej nici DNA podczas syntezy cDNA.
Rysunek 02: RNaza H
RNaza H jest również wykorzystywana w testach ochrony przed nukleazą. Może być również włączony do usuwania ogona poli A z mRNA. RNaza H ma zdolność niszczenia niekodującego RNA wewnątrz i na zewnątrz komórki. Jony metali są wymagane jako kofaktory dla tej aktywności białka. Do hamowania enzymu RNazy H można zastosować chelator (EDTA).
Jakie są podobieństwa między RNASE A i RNASE H?
- Oba są z natury białkami.
- Oba są endorybonukleazą
- Oba mogą degradować RNA.
- Oboje przeprowadzają reakcje hydrolityczne.
- Laboratoria molekularne wykorzystują oba te rozwiązania.
Jaka jest różnica między RNASE A a RNASE H?
RNASE A kontra RNASE H |
|
| RNaza A to rybonukleaza trzustkowa, która specyficznie odcina koniec 3’ niesparowanych reszt cytozyny i uracylu jednoniciowego RNA przy wyższym stężeniu soli. | RNaza H jest niespecyficznym enzymem rybonukleazy, który może degradować RNA w hybrydzie RNA-DNA poprzez reakcję hydrolityczną. |
| Natura rozszczepiania RNA | |
| RNaza A specyficznie tnie jednoniciowy RNA przy wyższym stężeniu soli. | RNaza H tnie RNA w hybrydzie RNA-DNA. |
| Potrzeba kofaktorów do działania | |
| RNaza A nie potrzebuje kofaktorów do swojej aktywności. | RNaza H potrzebuje jonów metali jako kofaktorów dla swojej aktywności. |
| Inhibitory aktywności białek | |
| Białko inhibitora rybonukleazy, kompleksy metali ciężkich i wanadanu urydyny hamują aktywność RNAzy A. | Chelator (EDTA) hamuje aktywność RNazy H. |
| Usunięcie startera RNA podczas replikacji DNA | |
| RNaza A nie jest używana do usuwania starterów RNA w replikacji DNA. | RNaza H jest używana do usuwania starterów RNA w replikacji DNA |
| Usunięcie szablonu DNA w syntezie komplementarnego DNA (C-DNA) | |
| RNaza A nie jest używana do usuwania matrycy RNA podczas syntezy komplementarnego DNA (C-DNA). | RNaza H jest używana do usuwania matrycy RNA podczas syntezy komplementarnego DNA (C-DNA). |
| Usunięcie ogona Poly-A z mRNA zhybrydyzowanego z Oligo (dt) | |
| RNaza A nie jest używana do usuwania „ogona poli-A” z mRNA zhybrydyzowanego z oligo (dt). | RNaza H służy do usuwania „ogona poli-A” z mRNA zhybrydyzowanego z oligo (dt) |
Podsumowanie – RNASE A vs RNASE H
Rybonukleazy to enzymy nukleazy, które mają zdolność rozszczepiania RNA na mniejsze jednostki. Są dwa rodzaje; endorybonukleazy i egzorybonukleazy. Endorybonukleaza to endonukleaza, która ma zdolność degradacji jednoniciowego lub dwuniciowego RNA. I rozcina wiązanie fosfodiestrowe w łańcuchu polinukleotydowym RNA. RNaza A i RNaza H to dwie endorybonukleazy. RNaza A jest rybonukleazą trzustkową, która specyficznie rozszczepia niesparowane reszty cytozyny i uracylu na końcu 3' jednoniciowego RNA przy wyższym stężeniu soli. RNaza H jest nieswoistym enzymem rybonukleazy, który może degradować RNA w hybrydzie RNA-DNA poprzez reakcję hydrolityczną. To jest różnica między RNazą A i RNazą H.
Pobierz PDF RNASE A vs RNASE H
Możesz pobrać wersję PDF tego artykułu i używać jej do celów offline zgodnie z notatką cytowania. Proszę pobrać wersję PDF tutaj Różnica między RNASE A i RNASE H
