Kluczowa różnica – HPLC vs HPTLC
Kluczowa różnica między HPLC a HPTLC polega na tym, że HPLC umożliwia ilościowe oddzielenie składników w próbce, podczas gdy HPTLC nie pozwala na ilościowe oddzielenie składników w próbce.
Chromatografia to fizyczna metoda rozdzielania stosowana do oddzielania i identyfikacji składników w mieszaninie. Zarówno HPLC, jak i HPTLC są technikami chromatograficznymi. HPLC to wysokosprawna chromatografia cieczowa. HPTLC to wysokowydajna chromatografia cienkowarstwowa.
Co to jest HPLC?
HPLC to wysokosprawna chromatografia cieczowa. Jest to technika analityczna stosowana do oddzielania, identyfikacji i ilościowego oznaczania składników w mieszaninie. W tej technice próbka jest rozpuszczana w odpowiednim rozpuszczalniku. Następnie rozpuszczalnik z próbką przepuszcza się przez pompę o zadanym ciśnieniu. Pompa jest wypełniona stałym materiałem adsorpcyjnym. Wtedy niektóre składniki silnie wiążą się z materiałem chłonnym, podczas gdy inne luźno. Powoduje to, że komponenty mają różne natężenia przepływu przez pompę. Dzięki temu komponenty można łatwo rozdzielić.
Rysunek 01: System HPLC
Materiał adsorbujący wypełniający pompę jest znany jako faza stacjonarna. Rozpuszczalnik z rozpuszczoną próbką nazywany jest fazą ruchomą. Pompa stosowana w tej technice nazywana jest kolumną. Kolumna jest wypełniona materiałem adsorbującym, najczęściej cząstkami krzemionki. Wielkość tych cząstek może wynosić od 2-50 μm. Na proces separacji ma wpływ skład fazy ruchomej oraz temperatura układu. Oddziaływania między fazą stacjonarną a składnikiem próbki mogą być oddziaływaniami hydrofobowymi, oddziaływaniami dipol-dipol, wiązaniami jonowymi itp.
Ciśnienie operacyjne HPLC jest znacznie wyższe niż w tradycyjnej chromatografii cieczowej. Leży około 50-350 barów. Różnica między chromatografią cieczową a HPLC polega na tym, że w chromatografii cieczowej próbka spada przez kolumnę grawitacyjnie, podczas gdy w HPLC próbka jest pod ciśnieniem przez kolumnę. Rozmiary kolumny i cząstek absorbentu są również bardzo małe w porównaniu z tradycyjną chromatografią cieczową. Jednak rozdzielczość podana przez technikę HPLC jest lepsza.
Co to jest HPTLC?
HPTLC to wysokowydajna chromatografia cienkowarstwowa. Jest to zaawansowana i zautomatyzowana forma tradycyjnej TLC. Ta technika zapewnia wydajne rozwiązanie w krótkim czasie. W tej metodzie analizy próbka i odniesienie mogą być analizowane w tym samym czasie, co pozwala na porównanie próbki z odniesieniem. Daje lepszą dokładność analityczną niż inne techniki chromatograficzne. Czas potrzebny na analizę jest krótszy. Technika ta jest techniką niedrogą.
Rysunek 02: Analiza barwników spożywczych przy użyciu HPTLC
Metoda HPTLC jest procesem prostym, a etap przygotowania próbki jest również wyeliminowany (w tradycyjnej TLC etap przygotowania próbki jest uwzględniony przed oddzieleniem. Etap ten obejmuje czyszczenie i wzbogacanie). Rozpuszczalnik można stosować bezpośrednio, bez żadnej obróbki wstępnej, chociaż inne techniki chromatograficzne wymagają obróbki wstępnej, takiej jak odgazowanie, filtracja itp.
Materiałem adsorbującym stosowanym w HPTLC jest krzemionka o bardzo małych rozmiarach cząstek. W tradycyjnej TLC wielkość cząstek krzemionki wynosi 5-20 μm, podczas gdy w HPTLC 4-8 μm. Próbkę nanosi się na płytkę HPTLC za pomocą aplikatora. Daje równomierną i bezpieczną aplikację. Następnie płytki umieszcza się w komorze posiadającej fazę ruchomą. Komora powinna być nasycona parą fazy ruchomej. Po procesie HPTLC, plamy, które się przesunęły, mogą zostać wykryte. Podczas wykrywania plam na płytce technika HPTLC wykorzystuje odpowiedni region UV lub komorę jodową.
Jaka jest różnica między HPLC a HPTLC?
HPLC a HPTLC |
|
| HPLC to wysokosprawna chromatografia cieczowa. | HPTLC to wysokowydajna chromatografia cienkowarstwowa. |
| Technika | |
| W HPLC faza ruchoma z rozpuszczalnikiem jest przepuszczana przez kolumnę wypełnioną fazą stacjonarną. | W HPTLC próbkę nanosi się na płytkę TLC i umieszcza się w komorze zawierającej fazę ruchomą; następnie pozwala się próbce migrować w górę płytki wraz z fazą ruchomą. |
| Pomiar | |
| W HPLC, różnice między szybkościami przepływu składników przez kolumnę są wykorzystywane do oddzielenia składników w próbce. | W HPTLC różnice między odległościami przebytymi przez każdy składnik w próbce są wykorzystywane do oddzielenia składników w próbce. |
| Separacja ilościowa | |
| HPLC umożliwia ilościowe oddzielenie składników w próbce. | HPTLC nie pozwala na ilościowe rozdzielanie składników w próbce. |
Podsumowanie – HPLC vs HPTLC
HPLC i HPTLC to dwie techniki chromatograficzne. Kluczowa różnica między HPLC a HPTLC polega na tym, że HPLC umożliwia ilościowe oddzielenie składników w próbce, podczas gdy HPTLC nie pozwala na ilościowe oddzielenie składników w próbce.
