Kluczowa różnica między HPLC a szybką HPLC polega na tym, że ciśnienie pompy, które stosujemy do HPLC wynosi około 40 MPa, podczas gdy ciśnienie pompy do szybkiej HPLC wynosi około 3-5 MPa.
Najpopularniejszą techniką, której używamy do oddzielania składników mieszaniny, jest „chromatografia cieczowa”. Istnieje kilka technik umożliwiających osiągnięcie tego celu, z których HPLC jest bardzo popularna. HPLC oznacza wysokosprawną chromatografię cieczową, która identyfikuje, określa ilościowo i oddziela składniki płynnej mieszaniny w szybki i wydajny sposób. Fast HPLC to specjalne zastosowanie HPLC, które ostatnio zwróciło uwagę osób zajmujących się badaniem roztworów.
Co to jest HPLC?
HPLC to wysokosprawna chromatografia cieczowa. Wykorzystuje wysokie ciśnienie do wypchnięcia rozpuszczalników tak, aby przeszły przez kolumnę. Jest to również idealny sposób na oddzielenie i badanie różnych związków, takich jak aminokwasy, kwasy nukleinowe, węglowodany, sterydy, antybiotyki i węglowodory. HPLC ma wiele zalet w stosunku do innych metod rozdzielania mieszanin, takich jak wyższa rozdzielczość i szybsza analiza. Eliminuje konieczność przepakowywania i regeneracji oraz zapewnia lepszą kontrolę nad parametrami, a tym samym zwiększa skuteczność separacji. Idealnie, HPLC nadaje się do zastosowań na dużą skalę, ponieważ może oddzielać bardzo małe cząstki i umożliwia stosowanie wysokich ciśnień, które ułatwiają przepływ rozpuszczalników.
Rysunek 01: Kolumna HPLC
W skrócie, sposób działania techniki HPLC jest następujący. Najpierw należy wprowadzić próbkę do strumienia fazy ruchomej w dyskretnych niewielkich ilościach za pomocą pompy. Ciśnienie pompy powinno być utrzymywane na poziomie 40 MPa. Ten strumień fazy ruchomej przesącza się przez kolumnę HPLC. Następnie składniki próbki również przechodzą przez kolumnę. Jednak ich prędkości ruchu różnią się od siebie ze względu na różnicę w interakcjach między składnikami próbki a adsorbentem wewnątrz kolumny. Nazywamy ten adsorbent jako fazą stacjonarną, ponieważ znajduje się wewnątrz kolumny (nie porusza się). Następnie, na końcu kolumny, możemy pobrać próbkę, która eluuje się z kolumny, dzięki czemu możemy osobno zbierać składniki w próbce.
Co to jest szybka HPLC?
Niedawno naukowcy z instytutu badawczego Schering Plough opracowali technikę szybkiej HPLC, która jest zaawansowaną wersją HPLC, ponieważ umożliwia jeszcze szybsze oddzielanie związków z mieszaniny. Technika ta, znana również jako szybka HPLC, wykorzystuje cząstki krzemionki topionego rdzenia o wielkości 2,7 μm, które są wytwarzane przez stapianie 0,5 μm porowatej krzemionki na cząsteczce stałej krzemionki. Te unikalnie wykonane cząstki sprawiają, że procedura separacji jest bardzo szybka i to również przy niskim ciśnieniu wstecznym niż to, które stosujemy w HPLC.
Rysunek 02: Aparatura FPLC
Szybka HPLC daje wyniki porównywalne z UPLC, ale naukowcy uważają, że ta technika jest lepsza, ponieważ nie wymaga bardzo drogiego sprzętu ultrawysokiego ciśnienia. Wspaniałe jest to, że szybka HPLC nie wymaga żadnych nowych protokołów laboratoryjnych.
Jaka jest różnica między HPLC a szybką HPLC?
HPLC to wysokosprawna chromatografia cieczowa, a szybka HPLC to zaawansowana forma wysokosprawnej chromatografii cieczowej. Kluczowa różnica między HPLC a szybką HPLC polega na tym, że ciśnienie pompy, której używamy do HPLC, wynosi około 40 MPa. Natomiast ciśnienie pompy dla szybkiej HPLC wynosi około 3-5 MPa. Ponadto możemy oddzielić różne związki, takie jak aminokwasy, kwasy nukleinowe, węglowodany, steroidy, antybiotyki i węglowodory przy użyciu techniki HPLC, podczas gdy technika szybkiej HPLC jest używana głównie do separacji białek.
Poniższa infografika przedstawia więcej informacji na temat różnicy między HPLC a szybką HPLC.
Podsumowanie – HPLC kontra szybka HPLC
HPLC to technika chromatografii cieczowej, która stała się bardzo popularna na całym świecie. Fast HPLC to nowa wersja HPLC, naukowcy z Schering Plough Institute opracowali tę nową technikę. Kluczowa różnica między HPLC a szybką HPLC polega na ciśnieniu pompy, którego używamy do rozdziału. To znaczy; ciśnienie pompy, której używamy do HPLC wynosi około 40 MPa. Ale ciśnienie pompy dla szybkiej HPLC wynosi około 3-5 MPa.
