Kluczowa różnica FPLC i HPLC polega na tym, że FPLC jest rodzajem chromatografii cieczowej, która oczyszcza duże biomolekuły, takie jak białka, nukleotydy i peptydy, podczas gdy HPLC jest rodzajem chromatografii cieczowej, która oddziela związki o małej masie cząsteczkowej.
Chromatografia cieczowa to technika stosowana do rozdzielania próbki na poszczególne składniki. To oddzielenie następuje w wyniku interakcji określonych próbek z fazami ruchomymi i stacjonarnymi. Składniki w próbce są rozdzielane na podstawie powinowactwa każdego składnika do fazy ruchomej w chromatografii cieczowej. Gdy faza ruchoma i próbka przechodzą przez kolumnę, składniki próbki zaczynają rozdzielać się na pasma, które można wykryć za pomocą spektroskopii UV-VIS. Dlatego FPLC i HPLC to dwa rodzaje technik chromatografii cieczowej.
Co to jest FPLC?
FPLC to rodzaj chromatografii cieczowej, która oczyszcza duże biocząsteczki, takie jak białka, nukleotydy i peptydy. Szybka chromatografia cieczowa białek (FPLC) została po raz pierwszy opracowana i wprowadzona na rynek w Szwecji przez firmę Pharmacia w 1982 roku. Jest często używana do analizy lub oczyszczania mieszanin białek. Odbywa się to w oparciu o zasadę powinowactwa składników próbki do poruszającego się płynu (faza ruchoma) i porowatego materiału stałego (faza stacjonarna). W FPLC fazą ruchomą jest bufor, a fazą stacjonarną jest żywica złożona z kulek. Zwykle składa się z usieciowanej agarozy umieszczonej w cylindrycznej szklanej lub plastikowej kolumnie.
Rysunek 01: Aparat FLPC (szybka chromatografia cieczowa białek)
W większości strategii FLPC stosuje się żywicę jonowymienną. W związku z tym białko będące przedmiotem zainteresowania zwiąże się z żywicą poprzez oddziaływanie ładunku. Technika FLPC wykorzystuje również dwa bufory: bufor 1 (bufor roboczy) i bufor 2 (bufor elucyjny). Początkowo, gdy przez kolumnę przepływa mieszanina buforu i próbki, białko będące przedmiotem zainteresowania w mieszaninie zwiąże się z żywicą poprzez oddziaływanie ładunku. Ale białko będące przedmiotem zainteresowania ulega dysocjacji i powraca do roztworu w buforze do wymywania, gdy bufor do wymywania przechodzi przez kolumnę pod koniec procesu. Później roztwór (eluent zawierający interesujące białko) przechodzi przez dwa detektory, które mierzą stężenie soli i stężenie białka. Ponieważ każde białko jest eluowane, podczas wykrywania pojawia się jako „szczyt” i można je zebrać do dalszego użycia.
Co to jest HPLC?
HPLC to rodzaj chromatografii cieczowej, która oddziela związki o małej masie cząsteczkowej. W 1969 roku pierwsza HPLC została wyprodukowana komercyjnie przez Waters Corporation, USA. W wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) mieszanina próbki (analit) w rozpuszczalniku (faza ruchoma) jest pompowana przez kolumnę z chromatograficznym materiałem wypełniającym (faza stacjonarna) pod wysokim ciśnieniem. Mieszanina próbki jest przenoszona przez ruchomy strumień gazu nośnego helu lub azotu.
Rysunek 02: HPLC (wysokosprawna chromatografia cieczowa)
Składniki w mieszaninie próbki, które w najmniejszym stopniu oddziałują z fazą stacjonarną lub najwięcej oddziałują z fazą ruchomą, szybciej opuszczają kolumnę. Z drugiej strony, składniki w mieszaninie próbki, które mają najwięcej interakcji z fazą stacjonarną lub najmniej interakcji z fazą ruchomą, będą opuszczać kolumnę wolniej. W oparciu o powyższą zasadę interakcji można rozdzielić składniki mieszaniny próbki. Ponadto detektor przyrządu identyfikuje każdy składnik mieszaniny próbki, który opuszcza kolumnę. HPLC służy do kontroli próbek środowiskowych i biologicznych pod kątem obecności lub nieobecności znanych związków, takich jak leki, toksyny lub pestycydy. Jest stosowany w różnych branżach, takich jak farmaceutyczna, środowiskowa, kryminalistyczna i chemiczna.
Jakie są podobieństwa między FPLC i HPLC?
- FPLC i HPLC to rodzaje chromatografii cieczowej.
- Oba są używane do oddzielania i identyfikacji próbek biologicznych.
- Posiadają ciekłą fazę ruchomą i stałą fazę stacjonarną.
- Obie techniki wykorzystują kolumnę do przechodzenia przez próbkę.
- Te techniki wykorzystują pompy, detektory, zawory i oprogramowanie do separacji i wykrywania próbek.
Jaka jest różnica między FPLC a HPLC?
FPLC to rodzaj chromatografii cieczowej, który służy do oczyszczania dużych biocząsteczek, takich jak białka, nukleotydy i peptydy. HPLC to rodzaj chromatografii cieczowej, który służy do oddzielania związków o małej masie cząsteczkowej. To jest kluczowa różnica między FPLC a HPLC. Ponadto FPLC wykorzystuje monitory pH i przewodności, a także kolektory frakcji. W przeciwieństwie do tego, HPLC nie używa monitorów pH i przewodności oraz kolektorów frakcji.
Poniższa infografika przedstawia więcej różnic między FPLC i HPLC w formie tabelarycznej.
Podsumowanie – FPLC vs HPLC
Chromatografia to laboratoryjna technika analityczna stosowana do oddzielania składników z mieszaniny. Jest podzielony na kilka typów, takich jak chromatografia kolumnowa, chromatografia gazowa, chromatografia cieczowa, chromatografia jonowymienna itp. FPLC i HPLC to dwa rodzaje technik chromatografii cieczowej. FPLC to rodzaj chromatografii cieczowej, który służy do oczyszczania dużych biocząsteczek, takich jak białka, nukleotydy i peptydy. Z drugiej strony, HPLC to rodzaj chromatografii cieczowej, która służy do oddzielania związków o małej masie cząsteczkowej. Oto podsumowanie różnicy między FPLC a HPLC.
