Kluczowa różnica między HPLC z odwróconą fazą a fazą normalną polega na tym, że HPLC z odwróconą fazą wykorzystuje niepolarną fazę stacjonarną i polarną fazę ruchomą, podczas gdy HPLC z normalną fazą wykorzystuje polarną fazę stacjonarną i mniej polarną fazę ruchomą.
HPLC z normalną fazą jest najstarszą techniką HPLC, którą Tswett używał do rozdzielania ekstraktów roślinnych; użył kredy w szklanej kolumnie. Był to klasyczny tryb chromatografii, który doprowadził do nazwania go „normalną” techniką. Z drugiej strony HPLC z odwróconą fazą jest przeciwieństwem normalnej techniki, którą ostatnio opracowali naukowcy.
Co to jest HPLC w odwróconym układzie faz?
HPLC z odwróconą fazą to technika chromatograficzna, w której używamy hydrofobowej fazy stacjonarnej. Spośród wszystkich metod HPLC stosujemy tę metodę w około 70% ze względu na jej szerokie zastosowanie i powtarzalność. Faza stacjonarna jest niepolarna, a faza ruchoma jest polarna.
W większości przypadków naukowcy stosują jako fazę ruchomą wodną mieszankę wody z mieszalnym polarnym rozpuszczalnikiem organicznym, takim jak acetonitryl lub metanol. Dlatego anality oddziałują z niepolarną fazą stacjonarną.
Co to jest HPLC z normalną fazą?
HPLC z normalną fazą to technika chromatograficzna, w której używamy hydrofilowej fazy stacjonarnej. Jest to tradycyjna metoda HPLC, choć nie używamy jej tak często. Faza stacjonarna jest polarna, a faza ruchoma jest niepolarna. Co ważniejsze, faza mobilna tej techniki jest w 100% organiczna. Oznacza to, że nie używa się do tego wody.
Rysunek 01: Profil próbki dla chromatogramów HPLC z fazą normalną i fazą odwróconą zgodnie z polarnością składników analitu.
Zazwyczaj faza stacjonarna zawiera krzemionkę, cyjano, diol, fazy związane z grupą aminową itp. Fazy ruchome obejmują rozpuszczalniki organiczne, takie jak heksan, octan etylu itp. Ta technika opiera się na zatrzymywaniu cząsteczek rozpuszczalnika lub analitu na biegunowa faza stacjonarna.
Jaka jest różnica między HPLC z odwróconą fazą a normalną fazą?
HPLC z odwróconą fazą to technika chromatograficzna, w której używamy hydrofobowej fazy stacjonarnej. Faza stacjonarna tej techniki jest niepolarna, podczas gdy faza ruchoma jest polarna. Ponadto naukowcy stosują wodną mieszankę wody z mieszalnym polarnym rozpuszczalnikiem organicznym, takim jak acetonitryl lub metanol jako fazę ruchomą w HPLC z odwróconymi fazami. W przeciwieństwie do tego, HPLC z normalną fazą jest techniką chromatograficzną, w której używamy hydrofilowej fazy stacjonarnej. Faza stacjonarna tej techniki jest polarna, podczas gdy faza ruchoma jest niepolarna. Ponadto naukowcy stosują rozpuszczalniki organiczne, takie jak heksan, octan etylu itp. jako fazę ruchomą w HPLC w fazie normalnej. Poniższa infografika przedstawia różnicę pomiędzy HPLC w odwróconym układzie faz a normalną fazą w formie tabelarycznej.
Podsumowanie – HPLC z odwróconą fazą a normalną fazą
Techniki HPLC z odwróconą fazą i normalną fazą to dwie techniki chromatografii cieczowej. Kluczowa różnica między HPLC z odwróconą fazą a fazą normalną polega na tym, że HPLC z odwróconą fazą wykorzystuje niepolarną fazę stacjonarną i polarną fazę ruchomą, podczas gdy HPLC z normalną fazą wykorzystuje polarną fazę stacjonarną i mniej polarną fazę ruchomą.
