Kluczowa różnica między testami Elisa i Elispot polega na tym, że Elisa to test immunoenzymatyczny, który określa całkowite stężenie wydzielanych białek sygnałowych, podczas gdy Elispot to test immunoenzymatyczny, który wykrywa poszczególne komórki wydzielające cytokiny.
Elisa i Elispot to dwa testy immunoenzymatyczne szeroko stosowane w medycynie, patologii roślin, biotechnologii i różnych gałęziach przemysłu farmaceutycznego. W tych technikach analit białka jest wykrywany przez skierowane przeciwko niemu przeciwciało. Elisa to najpopularniejszy test immunoenzymatyczny stosowany w laboratoriach. Z drugiej strony, Elispot to test immunoenzymatyczny, który nie jest używany zamiast Elisy, ale raczej używany jako dodatek do Elisy w laboratoriach.
Co to jest test Elisy?
Elisa to test immunoenzymatyczny, który określa całkowite stężenie wydzielanych białek sygnałowych. Jest to szeroko stosowany analityczny test biochemiczny, który został po raz pierwszy opisany przez Engvalla i Perlmanna w 1971 roku. Ta technika wykorzystuje enzymatyczny test immunologiczny w fazie stałej do wykrywania obecności określonego białka w płynnej próbce przy użyciu przeciwciał skierowanych przeciwko temu specyficznemu białku. Test ten jest powszechnie stosowanym narzędziem diagnostycznym w medycynie, patologii roślin i biotechnologii.
Mechanizm testu ELISA
W większości testów ELISA nieznana ilość antygenu jest na początku unieruchomiona na stałym podłożu (płytka mikrolitrowa). Następnie pasujące przeciwciało pierwszorzędowe nakłada się na powierzchnię stałego podłoża. To przeciwciało tworzy kompleks z antygenem (kompleks antygen-przeciwciało). Pierwotne przeciwciało związane z antygenem może być wykryte przez przeciwciało drugorzędowe, które jest połączone z enzymem przez biokoniugację. W ostatnim etapie testu Elisa dodaje się substancję zawierającą substrat enzymu. Jeśli istnieje prawidłowe wiązanie pierwotnego przeciwciała z antygenem, substrat wytwarza wykrywalną zmianę koloru. Ostatecznie oznacza to ilościowo antygen w próbce.
Rysunek 01: Różne typy Elisy
Ponadto istnieją różne podejścia do Elisy, takie jak bezpośrednia Eliza i pośrednia Eliza. Obecnie stosuje się różne testy Elisa do wykrywania ludzkich patogenów, takich jak Mycobacterium tuberculosis, rotawirus, wirus zapalenia wątroby typu B, wirus zapalenia wątroby typu C, E.coli wytwarzające enterotoksynę, HIV i SARS-CoV-2.
Co to jest test Elispot?
Elispot to test immunoenzymatyczny, który wykrywa poszczególne komórki wydzielające cytokiny. Cecil Czerkinsky po raz pierwszy opisał ELISpot w 1983 roku. Jest to rodzaj testu, który koncentruje się na ilościowym pomiarze częstotliwości wydzielania cytokin przez pojedynczą komórkę. Jest również klasyfikowana jako technika wykorzystująca przeciwciała do wykrywania biologicznego lub chemicznego analitu białka. Test Fluorospot jest odmianą testu Elispot, który wykorzystuje fluorescencję do analizy wielu analitów (bardziej sekrecyjnych białek).
Mechanizm testu Elispot
W tym mechanizmie, przeciwciała monoklonalne specyficzne dla cytokin są początkowo dodawane do studzienek płytek mikrolitrowych. Następnie do studzienek dodaje się pożądane obserwowane komórki. Później komórki są inkubowane. Podczas inkubacji komórek pozwala się komórkom reagować na dowolne bodźce i wydzielać cytokiny. Cytokiny, które zostały wydzielone przez inkubowane komórki, przyłączą się do przeciwciał, ponieważ komórki są otoczone przez przeciwciała monoklonalne specyficzne dla cytokin.
Rysunek 02: Test Elispot
Aby wykryć te przeciwciała monoklonalne swoiste dla cytokin, do studzienki dodaje się biotynylowane swoiste przeciwciała detekcyjne. Biotynylowane swoiste przeciwciała detekcyjne wychwytują w studzienkach przeciwciała monoklonalne swoiste dla cytokin. Ponadto do studzienek dodaje się koniugaty streptawidyna-enzym w celu związania się z przeciwciałami wykrywającymi. W ostatnim etapie do dołków dodaje się określone substraty. Reakcje koniugatów enzymów i substratów powodują powstanie wyraźnych plamek w studzienkach. Te odrębne plamki są odczytywane na automatycznym czytniku ELISpot. Ostatecznie pozwoli to na dalsze obliczenie częstotliwości wydzielania cytokin.
Jakie są podobieństwa między Elisą i Elispotem?
- Oba są testami immunoenzymatycznymi.
- Oba testy wykrywają określone anality białkowe.
- Te testy wykorzystują specyficzne przeciwciała do identyfikacji analitów białkowych.
- Oba testy wykorzystują enzymy i substraty.
- Są używane jako narzędzie diagnostyczne w laboratoriach medycznych.
Jaka jest różnica między Elisą a Elispotem?
Elisa to test immunoenzymatyczny, który określa całkowite stężenie wydzielanych białek sygnałowych. Z drugiej strony, Elispot to test immunoenzymatyczny, który mierzy poszczególne komórki wydzielające cytokiny. To jest kluczowa różnica między Elisą a Elispotem. Ponadto w teście Elisa antygen najpierw unieruchamia się w mikrolitrowych studzienkach. Natomiast w teście Elispot przeciwciało najpierw unieruchamia się na studzienkach mikrolitrowych. Jest to więc kolejna różnica między Elisą a Elispotem.
Poniższa infografika przedstawia szczegółową analizę różnicy między Elisą a Elispotem w formie tabelarycznej.
Podsumowanie – Elisa kontra Elispot
Elisa i Elispot to dwa testy immunoenzymatyczne szeroko stosowane w medycynie, patologii roślin, biotechnologii i różnych gałęziach przemysłu farmaceutycznego. Elisa wykrywa obecność ligandu (białka) w płynnej próbce za pomocą przeciwciał skierowanych przeciwko mierzonemu ligandowi. Test Elispot jest szeroko stosowaną metodą monitorowania odpowiedzi immunologicznych. Wykrywa poszczególne komórki wydzielające cytokiny za pomocą przeciwciał. Jest to technika zarówno testu immunologicznego, jak i biologicznego. Tak więc jest to podsumowanie różnicy między Elisą a Elispotem.
