Kluczowa różnica – RPMI vs DMEM
Większość badań dotyczy hodowli komórek zwierzęcych, a zatem badania te wymagają utrzymania linii komórek zwierzęcych w specjalnych warunkach wzrostu. Hodowla komórek zwierzęcych jest szeroko stosowana w badaniach farmakologicznych w celu identyfikacji metabolizmu leków, w diagnostyce chorób i badaniach nad rakiem. Pożywka do hodowli komórkowej jest ważnym aspektem hodowli komórek zwierzęcych. Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) i Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) to dwa podłoża hodowlane stosowane w hodowli komórek zwierzęcych. RPMI to pożywka szeroko stosowana do hodowli komórek ssaków w hodowli zawiesinowej. DMEM jest zmodyfikowanym typem podłoża podstawowego o czterokrotnie zwiększonym stężeniu aminokwasów i witamin. DMEM stosuje się w hodowli komórek w hodowlach przylegających. Kluczową różnicą między tymi dwoma mediami jest rodzaj kultury mediów. RPMI stosuje się w hodowlach zawiesinowych, natomiast DMEM stosuje się do hodowli komórek przylegających.
Co to jest RPMI?
RPMI lub Roswell Park Memorial Institute Medium jest również określane jako RPMI 1640. Nazwa mediów została wyprowadzona przez instytut, w którym media zostały odkryte. Pożywka ta jest powszechnie stosowana w hodowli komórek zwierzęcych, zwłaszcza do wzrostu komórek ssaków. Zostały pierwotnie opracowane do hodowli ludzkich limfocytów.
Następujące składniki są zawarte w RPMI.
- Glukoza
- wskaźnik pH (czerwień fenolowa)\
- Sole (chlorek sodu, wodorowęglan sodu, fosforan disodu, chlorek potasu, siarczan magnezu i azotan wapnia)
- Aminokwasy
- Witaminy (i-inozytol, chlorek choliny, kwas para-aminobenzoesowy, kwas foliowy, nikotynamid, chlorowodorek pirydoksyny, chlorowodorek tiaminy, pantotenian wapnia, biotyna i ryboflawina, cyjanokobalamina)
Specjalną cechą RPMI jest zwiększone stężenie fosforanów w podłożu. RPMI jest używany w atmosferze 5% dwutlenku węgla. Zapewni to maksymalne i optymalne warunki do wzrostu komórek. pH pożywki jest utrzymywane na poziomie 8,0 przez system buforowania wodorowęglanowego.
Rysunek 01: Hodowla komórek na szalce Petriego
Zastosowania RPMI w hodowli komórek
- Hodowla ludzkich limfocytów T i B, komórek szpiku kostnego i hybrydoma.
- Służy do badania ludzkich komórek nowotworowych.
Co to jest DMEM?
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) jest zmodyfikowaną pożywką, która jest przygotowana komercyjnie. Oryginalna konsystencja średniego proszku jest żółta. W DMEM stężenie witamin wzrasta nawet czterokrotnie, tym samym zwiększając zawartość składników odżywczych w pożywce.
DMEM jest również modyfikowany poprzez dodanie większej ilości soli, takich jak azotan żelazowy, pirogronian sodu i niektóre nie-niezbędne aminokwasy, takie jak seryna i glicyna. Zmieniony jest również skład glukozy w pożywce. Oryginalna formulacja składa się z 1000 mg/L glukozy, podczas gdy w DMEM stężenie wzrasta do 4500 mg/L. DMEM wymaga również uzupełnienia podłoża surowicy, ponieważ nie jest to podłoże kompletne. Najczęściej DMEM uzupełnia się płodową surowicą bydlęcą (FBS). FBS dostarcza wymagane białka i czynniki wzrostu do procesu hodowli.
pH podłoża zmienia się po dodaniu wodorowęglanu sodu. pH pożywki przed dodaniem wodorowęglanu sodu wynosi około 6,80 – 7,40, natomiast pH po dodaniu wodorowęglanu sodu mieści się w zakresie 7,60 – 8,20. Temperatura przechowywania medium wynosi 2 – 8 0C.
Rysunek 02: DMEM
Zastosowania DMEM
- Zbadanie zdolności poliomawirusa do tworzenia blaszek w komórkach embrionalnych myszy.
- W badaniach hamowania kontaktu.
- Badania i analizy kultur komórek kurzych.
Jakie są podobieństwa między RPMI a DMEM?
- Zarówno RPMI, jak i DMEM są używane w hodowli komórek zwierzęcych.
- Zarówno nośniki RPMI, jak i DMEM są preparatami płynnymi.
- Zarówno podłoża RPMI, jak i DMEM zawierają niezbędne aminokwasy, witaminy i sole nieorganiczne wymagane do wzrostu.
- Zarówno nośniki RPMI, jak i DMEM są niekompletne. Dlatego należy dodać serum.
- Zarówno nośniki RPMI, jak i DMEM wykorzystują glukozę jako źródło węgla.
- Zarówno media RPMI, jak i DMEM mają wyższe pH.
Jaka jest różnica między RPMI a DMEM?
RPMI a DMEM |
|
| RPMI to pożywka szeroko stosowana do hodowli komórek ssaków w hodowli zawiesinowej. | DMEM to zmodyfikowany typ podłoża podstawowego o zwiększonym stężeniu aminokwasów i witamin. |
| Obecność dodatkowych fosforanów | |
| Obecny w RPMI. | Nieobecny w DMEM. |
| Użyj | |
|
Służy do hodowli komórek w hodowlach przylegających. Jest przyzwyczajony,
|
| Rodzaje kultury | |
| RPMI jest używany do hodowli w zawiesinie. | DMEM jest używany do hodowli z przylegającymi komórkami. |
Podsumowanie – RPMI vs DMEM
Zarówno RPMI, jak i DMEM są szeroko stosowane w hodowli komórek zwierzęcych, zwłaszcza do hodowli linii komórek zwierzęcych, w tym limfocytów in vitro. DMEM to zmodyfikowana pożywka podstawowa, w której występuje zwiększone stężenie składników odżywczych. RPMI opracowany przez Roswell Park Memorial Institute jest również podłożem stosowanym w hodowli komórek zwierzęcych, zwłaszcza dla limfocytów ssaków. Oba media są dostępne w handlu. To jest różnica między RPMI a DMEM.
