Transformacja a transfekcja
Transformacja i transfekcja to dwie proste techniki stosowane do wprowadzenia obcego genu do komórki gospodarza. Jednak te techniki zależą od typu systemu hosta lub systemu wektorowego.
Co to jest transformacja komórek?
Transformacja to technika wykorzystywana do wprowadzania genów do komórek drożdży i bakterii. Technika ta zwykle powoduje dziedziczne zmiany w genach, a zatem ekspresja genu jest trwała. Transformacja bakteryjna została po raz pierwszy wprowadzona w 1928 roku przez Fredericka Griffitha. Następnie, na początku lat 70., technika ta została zastosowana w E.coli. Podczas procesu transformacji E. coli, komórki są moczone w lodowatym roztworze CaCl2 Ten etap sprawia, że komórki E.coli są kompetentne. Następnie kompetentne komórki miesza się z plazmidowym DNA i inkubuje na lodzie przez 20-30 min. Następnie poddawany jest krótki szok cieplny w celu umożliwienia przeniesienia DNA do komórki. Na koniec komórki umieszcza się w bulionie odżywczym i inkubuje w 37°C przez 60-90 min w celu ustalenia plazmidów. Po pomyślnym zakończeniu tych etapów transformowane komórki można umieścić na odpowiednim podłożu do namnażania komórek. Ponieważ transformacja jest uważana za nieefektywną technikę, nie może być stosowana do przygotowania banków klonów.
Co to jest transfekcja komórek?
Transfekcja to metoda wprowadzenia obcego genu, zwykle do komórek ssaków. Istnieją dwie metody transfekcji; mianowicie transfekcja przejściowa i transfekcja stabilna. W przejściowej transfekcji ekspresja genów jest dostępna przez ograniczony czas; w ten sposób zmiana genu powoduje tymczasową ekspresję. Ta metoda transfekcji jest prosta i szybka; dlatego może być używany rutynowo. Jedną z wad przejściowej transfekcji jest trudność zastosowania systemów syntezy białek na dużą skalę.
Podczas stabilnej transfekcji gen docelowy jest integrowany z genomem komórki gospodarza, dzięki czemu ekspresja genu jest trwała, w przeciwieństwie do transfekcji przejściowej.
Jaka jest różnica między transformacją a transfekcją?
• Transformacja to wprowadzenie genu do komórki prokariotycznej (bakteryjnej i drożdżowej), podczas gdy transfekcja jest zwykle nazywana wprowadzeniem genu do komórki ssaka.
• Transformacja powoduje dziedziczne zmiany w genach, podczas gdy transfekcja może skutkować czasową ekspresją lub trwałymi zmianami w genach.
