Kluczowa różnica między testem kolorymetrycznym a fluorometrycznym polega na tym, że test kolorymetryczny określa stężenie barwnych związków w roztworze, podczas gdy test fluorometryczny określa mechanizm kinetyczny roztworu.
Test biochemiczny to technika, która analitycznie wykrywa lub określa ilościowo aktywność cząsteczki lub substancji biologicznej. Jest to proces in vitro. Test kolorymetryczny i test fluorometryczny to dwa rodzaje powszechnych testów biochemicznych przeprowadzanych w laboratoriach. Wiele technik, takich jak ELISA i western blotting, to również złożone testy biochemiczne do ilościowego określania aktywności metabolicznej i pomiaru funkcjonalnego zachowania biocząsteczek, takich jak białka, enzymy i inne małe cząsteczki. Tego typu testy są używane do identyfikacji interakcji białko-DNA, białko-RNA i białko-białko.
Co to jest test kolorymetryczny?
Test kolorymetryczny to technika, która określa stężenie barwnych związków w roztworze. Innymi słowy, test kolorymetryczny to reakcja, która prowadzi do zmiany koloru w wyniku reakcji enzymatycznej lub chemicznej między odczynnikami a analitami. Testy kolorymetryczne są praktykowane w biochemii do testowania enzymów, określonych związków, hormonów, przeciwciał i innych analitów. Używają kolorymetrów lub spektrofotometrów. Kolorymetry to przyrządy, które charakteryzują kolorowe próbki w celu zapewnienia obiektywnej miary cech koloru. Spektrofotometr to urządzenie, które mierzy natężenie światła w funkcji koloru lub długości fali światła.
Rysunek 01: Test kolorymetryczny
Jak działa test kolorymetryczny?
W teście kolorymetrycznym przygotowuje się płytkę z określonym przeciwciałem związanym ze studzienkami. Następnie dodaje się próbkę. Może to umożliwić próbce związanie się z przeciwciałem. Następnie do dołków dodaje się przeciwciało detekcyjne i substrat, aby zareagowały z sondą detekcyjną. Roztwór zatrzymujący jest dodawany na koniec przed odczytem. Pusta studzienka, zwana ślepą, pozostaje bez próbki. W teście kolorymetrycznym im ciemniejszy kolor, tym większe stężenie analitu. Zwykle do odczytu potrzebna jest tylko jedna długość fali. Ale jeśli istnieje pomiar referencyjny, używane są dwie lub więcej długości fal.
Co to jest test fluorometryczny?
Test fluorometryczny to technika, która określa mechanizm kinetyczny reakcji enzymatycznych. Test fluorometryczny ma miejsce z utworzeniem produktu fluorescencyjnego z podłoża niefluorescencyjnego lub odwrotnie. Test ten wykorzystuje również transfer energii rezonansu fluorescencji (FRET), gdzie reakcja enzymatyczna zmienia położenie dwóch fluoroforów w substracie, zmieniając w ten sposób intensywność fluorescencji.
Rysunek 02: Test fluorometryczny
Testy fluorometryczne są generalnie znacznie bardziej czułe niż inne testy. Oszacowania diagnostycznego enzymu w próbkach tkanek, komórek lub płynów pacjentów wzrastają ze względu na jego wyższą czułość.
Jak działa test fluorometryczny?
W teście fluorymetrycznym, do próbki na płytce dodaje się substrat i odczytuje się odpowiedź fluorescencyjną za pomocą czytnika płytek. Tutaj każda komórka jest mierzona osobno. Płytki nieprzezroczyste stosuje się w testach fluorometrycznych. Zmniejsza to rozpraszanie światła. Do tego typu testu potrzebne są dwie długości fali. Jedna długość fali służy do wykrywania wzbudzenia, a druga do emisji.
Jakie są podobieństwa między testem kolorymetrycznym a fluorometrycznym?
- Test kolorymetryczny i test fluorometryczny to dwa rodzaje testów biochemicznych.
- Oba testy są przeprowadzane w diagnostyce medycznej.
- Te testy obejmują reakcję enzymatyczną.
- Oba testy obejmują substrat i anality.
Jaka jest różnica między testem kolorymetrycznym a fluorometrycznym?
Test kolorymetryczny to technika, która określa stężenie barwnych związków w roztworze, natomiast test fluorometryczny to technika, która określa mechanizm kinetyczny reakcji enzymatycznych. Jest to więc kluczowa różnica między testem kolorymetrycznym a fluorymetrycznym. Ponadto testy fluorometryczne są bardziej czułe niż testy kolorymetryczne; w ten sposób testy fluorometryczne mają zdolność wykrywania większej liczby analitów. Jest to zatem kolejna ważna różnica między testem kolorymetrycznym a fluorymetrycznym. Ponadto testy fluorometryczne wymagają dwóch długości fali, podczas gdy testy kolorymetryczne są przeprowadzane przy jednej długości fali.
Poniższa infografika przedstawia więcej różnic między testem kolorymetrycznym i fluorymetrycznym.
Podsumowanie – Test kolorymetryczny a test fluorometryczny
Test biochemiczny to proces analityczny używany do określenia i ilościowej oceny metabolicznych reakcji komórkowych. Test kolorymetryczny i test fluorometryczny to dwa rodzaje testów biochemicznych. Test kolorymetryczny to reakcja, która prowadzi do zmiany koloru w wyniku reakcji enzymatycznej lub chemicznej między odczynnikami a analitami, natomiast test fluorometryczny jest techniką stosowaną do określenia mechanizmu kinetycznego reakcji enzymatycznych. Oba testy zależą od reakcji enzymatycznej obejmującej substrat i analit. Testy fluorometryczne są bardziej czułe niż testy kolorymetryczne. Co najważniejsze, testy fluorometryczne wymagają dwóch długości fali, podczas gdy testy kolorymetryczne można przeprowadzać tylko przy jednej długości fali. W ten sposób podsumowuje różnicę między testem kolorymetrycznym a fluorymetrycznym.
