Kluczowa różnica – nitroceluloza a membrana nylonowa
Blotting to ważna technika wykrywania określonych sekwencji DNA, RNA i białek z ich mieszanin w biologii molekularnej. Odbywa się to za pomocą membrany zwanej blot. Istnieją różne techniki blottingu, takie jak Northern, Southern i Western blotting. Wybór odpowiedniej membrany do procesu blottingu powinien być starannie wykonany, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu i błędnym wykryciom. Nitroceluloza, nylon i PVDF są powszechnie stosowanymi membranami w technikach blottingu. Mają różne cechy. Kluczową różnicą między membraną nitrocelulozową a nylonową jest to, że błony nitrocelulozowe mają wysoki potencjał do immobilizacji białek, podczas gdy błony nylonowe mają wysoki potencjał do immobilizacji kwasów nukleinowych. Jednak oba typy membran są często używane w technikach blottingu.
Co to jest membrana nitrocelulozowa?
Membrana nitrocelulozowa jest powszechnie stosowanym filtrem membranowym w technikach blottingu kwasów nukleinowych i białek. Posiada wysoki potencjał wiązania białek. Stąd membrany nitrocelulozowe są szeroko stosowane w technice western blotting. Membrany nitrocelulozowe są kompatybilne ze wszystkimi technikami hybrydyzacji i wykazują doskonałą zdolność wiązania bez zakłóceń. Membrany nitrocelulozowe mają naturalny charakter hydrofilowy. Dokonują hydrofilowej interakcji z cząsteczkami i skutecznie unieruchamiają je na błonie. Komercyjne membrany nitrocelulozowe są dostępne w dwóch rozmiarach porów: 0,45 i 0,2 µm.
Rysunek 01: Membrana nitrocelulozowa stosowana w Western blotting
Co to jest membrana nylonowa?
Membrana nylonowa to kolejny rodzaj komercyjnej membrany stosowanej w technikach blottingu. Jest alternatywnie stosowany z membranami nitrocelulozowymi do blottingu południowej i północnej. Membrany nylonowe są idealne do Southern blotting niż nitroceluloza ze względu na ich wysokie powinowactwo do wiązania z DNA. Ze względu na kilka unikalnych cech membran nylonowych, naukowcy powszechnie stosują membrany nylonowe do blottingu południowej i północnej zamiast membrany nitrocelulozowej. W przeciwieństwie do nitrocelulozy, membrany nylonowe są również zalecane do usuwania izolacji i ponownego sondowania.
Rysunek 02: Membrana nylonowa używana do Southern blotting
Jaka jest różnica między membraną nitrocelulozową a nylonową?
Nitroceluloza a membrana nylonowa |
|
| Membrany nitrocelulozowe są kruche. | Membrany nylonowe są mniej kruche. |
| Obsługa | |
| Są trudne w obsłudze. | Są łatwe w obsłudze. |
| Reprobowanie | |
| Nieobsługiwane membrany nitrocelulozowe są trudne do ponownego sondowania. | Ponowne próbkowanie jest łatwe dzięki nylonowym membranom. |
| Kompatybilność z różnymi warunkami przechowywania | |
| Membrany nitrocelulozowe mają mniejszą wytrzymałość, aby wytrzymać różne warunki przechowywania. | Membrany nylonowe lepiej reagują na różne warunki przechowywania. |
| Użyj | |
| Wymagane jest wstępne zwilżanie. | Zwilżanie wstępne nie jest wymagane w przypadku membran nylonowych. |
| Hydrofilna natura | |
| Membrany nitrocelulozowe są z natury hydrofilowe, ale są mniej hydrofilowe niż membrany nylonowe. | Są z natury wysoce hydrofilowe. |
| Potencjał unieruchomienia | |
| Membrany nitrocelulozowe mają mniejsze powinowactwo do kwasów nukleinowych. Ale ma wysokie powinowactwo do białek. | Membrany nylonowe mają wysoki potencjał wiązania z kwasami nukleinowymi niż błony nitrocelulozowe. |
Podsumowanie – Nitroceluloza kontra membrana nylonowa
Membrany nitrocelulozowe i nylonowe to specjalne arkusze stosowane w technice blottingu w celu odtworzenia wzoru prążkowania na żelu. Dają możliwość wykrycia określonej sekwencji lub białka z mieszanin poprzez ich unieruchomienie na błonie. Po unieruchomieniu cząsteczek na błonie można je wykorzystać jako substrat do analizy hybrydyzacyjnej ze znakowanymi sondami. Membrana nitrocelulozowa jest powszechnie stosowana do wykrywania białek w technice Western blot ze względu na jej wysokie powinowactwo wiązania z białkami. Membrany nylonowe są często używane do blottingu południowej i północnej. Taka jest różnica między membraną nitrocelulozową a nylonową.
