Kluczowa różnica między BL21 i DH5 Alpha polega na tym, że BL21 jest genetycznie zmodyfikowaną kompetentną komórką E. coli z niedoborem proteazy, używaną głównie do ekspresji białka, podczas gdy DH5 Alpha jest genetycznie zmodyfikowaną kompetentną komórką E. coli z mutacją recA1 stosowaną głównie do transformacji plazmidu.
E. coli jest jednym ze znanych organizmów wybieranych do produkcji rekombinowanego białka. Na przestrzeni lat stała się najpopularniejszą platformą ekspresji. Wykorzystywana jest również jako fabryka ogniw. BL21 i DH5 Alpha to dwie genetycznie zmodyfikowane komórki E. coli, używane obecnie odpowiednio do ekspresji białek i transformacji plazmidów.
Co to jest BL21?
BL21 jest genetycznie zmodyfikowaną kompetentną komórką E.coli z niedoborem proteazy, używaną głównie do ekspresji białek. E. coli BL21 to komórka bakteryjna pochodząca ze szczepu B. Posiada defekty proteazy Lon i proteazy błony zewnętrznej ompT. Jest powszechnie stosowany do ekspresji rekombinowanych białek, ponieważ normalnie zapewnia stabilność eksprymowanym białkom. BL21 jest użyteczny do ekspresji białka z DNA pCold I-IV i DNA pCold TF. Ale ta kompetentna komórka E. coli nie jest przeznaczona do systemu ekspresji białka przy użyciu promotora T7, takiego jak system pET. Powodem tego jest to, że BL21 nie wyraża polimerazy RNA T7. Dodatkowo nie zaleca się stosowania do konstrukcji lub przygotowania plazmidu, ponieważ nie zawiera on mutacji recA.
Rysunek 01: BL21
BL21 został po raz pierwszy opisany przez Studiera w 1986 roku po różnych modyfikacjach linii B. Komórki BL21 mają niedobór proteazy LON, która degraduje wiele obcych białek. Ponadto brakuje innego genu kodującego proteazę błony zewnętrznej (OmpT), której funkcją jest degradacja białek zewnątrzkomórkowych. Brak tych białek powoduje udaną produkcję obcego białka w komórkach E. coli BL21. Ponadto mutacja hsdSB w tych komórkach zapobiega metylacji obcego DNA i zakłóceniom w komórkach BL21.
Co to jest DH5 Alpha?
DH5 Alpha to genetycznie zmodyfikowana kompetentna komórka E. coli z mutacją recA1, która jest używana głównie do transformacji plazmidów. Komórki DH5 Alpha E. coli są genetycznie modyfikowane przez amerykańskiego biologa Douglasa Hanahana, aby zmaksymalizować wydajność transformacji. Komórka DH5 Alpha ma trzy różne mutacje: recA1, endA1 i lacZΔM15. recA1 jest mutacją jednopunktową, która zastępuje glicynę 160 resztą kwasu asparaginowego w polipeptydzie recA. Mutacja ta dezaktywuje aktywność rekombinaz i dezaktywuje rekombinację homologiczną. Mutacja endA1 inaktywuje wewnątrzkomórkową endonukleazę, która zapobiega degradacji wstawionego plazmidu.
Rysunek 02: DH5 Alpha
Co więcej, mutacja lacZΔM15 umożliwia niebiesko-białe badanie przesiewowe transformowanych komórek. Te komórki są komórkami kompetentnymi. Są one często używane z transformacją chlorkiem wapnia do wstawienia pożądanego plazmidu. W ostatnich badaniach stwierdzono, że komórka DH5 Alpha metodą Hanahana była najbardziej wydajną komórką kompetentną do transformacji plazmidu.
Jakie są podobieństwa między BL21 a DH5 Alpha?
- BL21 i DH5 Alpha to dwie genetycznie zmodyfikowane bakterie E.coli
- Obie są kompetentnymi komórkami.
- Składają się z różnych mutacji.
- Oboje nie mają naturalnego siedliska.
- Są one wykorzystywane do celów laboratoryjnych, takich jak badania ekspresji i procedury klonowania.
Jaka jest różnica między BL21 a DH5 Alpha?
BL21 jest genetycznie zmodyfikowaną kompetentną komórką E. coli z niedoborem proteazy, używaną głównie do ekspresji białek. Z drugiej strony, DH5 Alpha jest genetycznie zmodyfikowaną kompetentną komórką E. coli z mutacją recA1 stosowaną głównie do transformacji plazmidu. To jest kluczowa różnica między BL21 a DH5 Alpha. Ponadto komórka BL21 E. coli nie ma mutacji recA1, podczas gdy komórka DH5 Alpha E. coli ma mutację recA1.
Poniższa infografika przedstawia różnice między BL21 i DH5 Alpha w formie tabelarycznej.
Podsumowanie – BL21 kontra DH5 Alpha
Niepatogenne szczepy E. coli są genetycznie opracowane przez naukowców do laboratoryjnych badań ekspresji i klonowania. BL21 i DH5 Alpha to dwie genetycznie zmodyfikowane komórki E. coli. BL21 jest używany głównie do badań ekspresji białek. Z drugiej strony, DH5 Alpha jest używany głównie do celów transformacji plazmidów. Tak więc jest to podsumowanie różnicy między BL21 i DH5 Alpha.
