Kluczowa różnica – żel układający a żel rozdzielający
Pojęcia żel do układania i żel rozdzielający są używane w wyjaśnianiu techniki SDS-PAGE. Elektroforeza w żelu SDS-PAGE lub dodecylosiarczan sodu-poliakrylamid jest techniką laboratoryjną, która służy do rozdzielania cząsteczek białek na podstawie ich masy cząsteczkowej. Teoria stojąca za tą techniką jest taka, że białka o różnych masach cząsteczkowych wykazują różne szybkości migracji; cząsteczki o niskiej masie cząsteczkowej migrują szybciej, podczas gdy cząsteczki o wysokiej masie cząsteczkowej migrują powoli. Medium do migracji jest żelem. Istnieją dwa rodzaje żeli określanych jako żel układający i żel rozdzielający. Kluczowa różnica między żelem układającym a żelem rozdzielającym polega na tym, że pH żelu układającego wynosi 6,8, podczas gdy pH żelu rozdzielającego wynosi 8,8.
Co to jest żel do układania?
Żel układający to nisko skoncentrowany żel poliakrylamidowy, który jest umieszczany na wierzchu bardziej skoncentrowanego żelu rozdzielającego (żel rozdzielający) w technice SDS-PAGE. Żel układający służy do poprawy rozdzielczości elektroforezy. Rozdzielczość wzrasta z powodu różnicy między stężeniami żelu układającego i rozdzielającego, które wpływają na białka w próbce. Ponieważ stężenie poliakryloamidu w żelu układającym jest niskie, wielkość porów jest większa. Pomaga to również w zwiększeniu separacji.
Żel układający jest sypkim żelem poliakrylamidowym z dużymi porami około 7% poliakrylamidu. Pory te nie stanowią znacznej bariery dla dużych cząsteczek białka. Stąd żel ten nieznacznie wpływa na ruchliwość tych białek. To sprawia, że rozdzielanie odbywa się zgodnie z ruchliwością i wielkością białka poprzez koncentrację ich pomiędzy dwoma żelami.
Rysunek 01: Żel akrylamidowy SDS-PAGE
PH żelu układającego wynosi 6,8. Jego pH jest kwaśne niż pH rozdzielania żelu o 2 jednostki pH. To pH oznacza niższą siłę jonową, a tym samym wyższą oporność elektryczną. To prowokuje mobilność białek niż inne naładowane cząstki obecne w żelu.
Co to jest żel rozdzielający?
Żel rozdzielający lub żel rozdzielający techniki SDS-PAGE to wysoce skoncentrowany żel poliakrylamidowy, który umieszcza się na wierzchu nisko stężonego żelu układającego. Żel rozdzielający zawiera dużą ilość poliakrylamidu (10%). pH tego żelu jest utrzymywane na poziomie 8,8, co jest wyższym poziomem pH niż w przypadku żelu układającego.
Rysunek 02: Aparat do elektroforezy żelowej
Gdy cząsteczki białka docierają do żelu rozdzielającego, migracja tych cząsteczek jest spowolniona, ponieważ żel rozdzielający jest żelem o wysokim stężeniu i małym rozmiarze porów, który może działać jako znacząca bariera dla ruchu cząsteczek białka. To spowolnienie pozwala innym białkom na powolną migrację, aby nadrobić zaległości, co skutkuje wąskim, skoncentrowanym pasmem pomiędzy dwoma żelami.
Jaki jest związek między żelem układającym w stos i żelem rozdzielającym?
W tym samym aparacie stosowane są oba typy żelu układającego i rozdzielającego
Jaka jest różnica między żelem układającym a żelem rozdzielającym?
Żel nakładający a żel rozdzielający |
|
| Żel układający to nisko skoncentrowany żel poliakrylamidowy, który jest umieszczany na wierzchu bardziej skoncentrowanego żelu rozdzielającego (żel rozdzielający) w technice SDS-PAGE. | Żel rozdzielający lub żel rozdzielający w technice SDS-PAGE to wysoce skoncentrowany żel poliakrylamidowy, który umieszcza się na wierzchu nisko stężonego żelu układającego. |
| Miejsce docelowe | |
| Żel nakładający jest umieszczany na żelu rozdzielającym (rozdzielającym). | Żel rozdzielający jest umieszczany na dnie pojemnika używanego do elektroforezy żelowej. |
| Stężenie | |
| Stężenie żelu układającego jest wysokie. | Stężenie żelu separującego jest niskie. |
| Zawartość poliakrylamidu | |
| Żel do układania zawiera około 7% poliakrylamidu. | Żel rozdzielający zawiera około 10% poliakrylamidu. |
| pH | |
| PH żelu układającego wynosi 6,8. | PH żelu rozdzielającego wynosi 8,8. |
| Rozmiar porów | |
| W żelu układającym występują duże pory. | W żelu rozdzielającym występują małe pory. |
| Rozdzielczość | |
| Układanie żelu zapewnia lepszą rozdzielczość. | Żel rozdzielający daje słabą rozdzielczość. |
Podsumowanie – żel układający a żel rozdzielający
Żel do układania i żel rozdzielający to dwa rodzaje żeli poliakrylamidowych stosowanych w celu uzyskania lepszej separacji cząsteczek białka w danej próbce. Różnica między żelem układającym a żelem rozdzielającym polega na tym, że pH żelu układającego wynosi 6,8, podczas gdy pH żelu rozdzielającego wynosi 8,8.
