Kluczowa różnica między jedną hybrydą drożdży a dwiema hybrydami drożdży polega na tym, że jedna hybryda drożdży jest testem in vitro do analizy interakcji DNA-białko, podczas gdy dwie hybrydy drożdży są testem opartym na in vitro do analizy interakcji białko-białko.
Badanie interakcji między cząsteczkami komórkowymi może pomóc w określeniu miejsc rozpoznawania zaangażowanych w ekspresję genów i szlaki białkowe. Interakcje DNA i białek są integralną częścią procesów komórkowych, takich jak modyfikacje DNA i regulacja transkrypcji itp. Z drugiej strony interakcje białek i białek odgrywają istotną rolę w procesach komórkowych, takich jak replikacja, transkrypcja, translacja i transdukcja sygnału. Dlatego niezwykle ważne jest zidentyfikowanie tych interakcji cząsteczek komórkowych za pomocą różnych testów. Drożdże jedno-hybrydowe i drożdże dwu-hybrydowe to dwa testy in vitro do analizy interakcji DNA-białko i białko-białko.
Co to jest hybryda drożdży One?
Hybryda drożdżowa (Y1H) jest testem in vitro do analizy interakcji wewnątrzkomórkowych DNA-białko. Metoda ta została po raz pierwszy opracowana przez Wanga i Reeda w 1993 roku. Od tego czasu wykazała większą moc w badaniach biologicznych. W tym teście występują dwa główne składniki: przynęta DNA i żer białkowy.
Rysunek 01: Hybryda drożdżowa
W procedurze sekwencja DNA (przynęta DNA) jest najpierw klonowana przed dwoma różnymi reporterami (HIS3, LacZ). Te konstrukty reporterowe są zintegrowane z genomem szczepu drożdży. Czynniki transkrypcyjne są uważane za ofiary białkowe. Czynniki transkrypcyjne są połączone z domeną aktywacji transkrypcji (AD) drożdżowego czynnika transkrypcyjnego Gal4 w celu wytworzenia białek hybrydowych. Całe to białko hybrydowe jest integrowane z plazmidem przed wprowadzeniem go do szczepu drożdży. Po wprowadzeniu rekombinowanego plazmidu, gdy czynnik transkrypcyjny oddziałuje z fragmentem DNA, ugrupowanie AD aktywuje ekspresję genu reporterowego (HIS3 lub LacZ). Sekwencjonowanie plazmidów pozwala na identyfikację czynnika transkrypcyjnego, który może wiązać się z fragmentem DNA. Ostatnio do badania diagnozy chorób zastosowano metodę hybrydową drożdży. Dlatego w przyszłości test ten będzie szerzej stosowany w badaniach naukowych i leczeniu.
Co to jest hybryda drożdży 2?
Dwóch hybryd drożdży (Y2H) to test in vitro do analizy interakcji wewnątrzkomórkowych białek i białek. Ta metoda została pierwotnie odkryta przez Stanleya Fieldsa i Ok-Kyu Songa w 1989 roku. Technika ta wykrywa interakcje białko-białko przy użyciu czynnika transkrypcyjnego Gal4 drożdży.
Rysunek 02: Hybryda drożdży 2
W tej metodzie najpierw konstruuje się dwie fuzje (hybrydy) przy użyciu interesujących nas białek: fuzję jednego białka z domeną wiążącą DNA (DBD) oraz przez fuzję drugiego białka z domeną aktywatora (AD) czynnika transkrypcyjnego Gal4. Białko połączone z DBD jest znane jako przynęta, podczas gdy białko połączone z AD jest znane jako ofiara. W szczepie drożdży, po interakcji przynęty i zdobyczy, DBD i AD znajdują się blisko siebie, aby wytworzyć funkcjonalny czynnik transkrypcyjny Gal4 powyżej genu reporterowego. Funkcjonalny czynnik transkrypcyjny aktywuje ekspresję genu reporterowego. Co więcej, metoda ta jest obecnie stosowana do badań przesiewowych interakcji integralnych białek błonowych w komórkach ssaków.
Jakie są podobieństwa między hybrydą drożdży 1 a hybrydą drożdży 2?
- Jedna hybryda drożdży i dwie hybrydy drożdży to dwa testy in vitro do analizy interakcji DNA-białko i białko-białko.
- Te testy wykorzystują szczepy drożdży.
- Oba testy wykorzystują domenę aktywacyjną (AD) czynnika transkrypcyjnego Gal4.
- Używają ekspresji genu reporterowego (HIS3 lub LacZ) do wykrywania interakcji.
- Mają przynętę i zdobycz.
- Oba testy są bardzo przydatne we współczesnych badaniach biologicznych.
Jaka jest różnica między hybrydą drożdży 1 a hybrydą drożdży 2?
Jedna hybryda drożdży jest testem in vitro do analizy interakcji DNA i białek, podczas gdy dwie hybrydy drożdży to test in vitro do analizy interakcji białek i białek. Jest to więc kluczowa różnica między jedną hybrydą drożdży a dwiema hybrydami drożdży. Co więcej, w jednej hybrydzie drożdży przynęta jest fragmentem DNA, a ofiara jest cząsteczką białka. Z drugiej strony, w dwóch hybrydach drożdży zarówno przynęta, jak i ofiara są cząsteczkami białka.
Poniższa infografika przedstawia różnice między drożdżami jedno-hybrydowymi a drożdżami dwu-hybrydowymi w formie tabelarycznej do porównania.
Podsumowanie – Hybryda drożdży 1 kontra Hybryda drożdży 2
Dwie hybryda drożdży i dwie hybrydy drożdży to dwa ważne testy in vitro. Hybryda drożdży jeden jest testem in vitro do analizy interakcji DNA i białek, podczas gdy hybryda drożdży dwa jest testem in vitro do analizy interakcji białek i białek. Jest to więc kluczowa różnica między drożdżami jedno-hybrydowymi a drożdżami dwu-hybrydowymi.
