Kluczowa różnica między kompetycyjnym i niekompetycyjnym testem ELISA polega na tym, że kompetycyjny ELISA wykorzystuje antygen hamujący, podczas gdy niekompetycyjny ELISA nie wykorzystuje antygenu hamującego w teście.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) to test immunologiczny, który wykrywa różne cele, takie jak przeciwciała, antygeny, białka i glikoproteiny. Jest to szybki i prosty sposób na wykonanie. Dlatego jest częściej wykorzystywany do celów badawczych i diagnostycznych. ELISA obejmuje użycie enzymów i specyficzne wiązanie przeciwciała i antygenu. W zależności od tego, jak zachodzą reakcje, istnieją cztery rodzaje testu ELISA: bezpośredni ELISA, pośredni ELISA, kanapkowy ELISA i ELISA hamowania. Bezpośredni, pośredni i kanapkowy test ELISA to rodzaje niekompetycyjnego testu ELISA, podczas gdy test ELISA z hamowaniem jest rodzajem testu komplementarnego. Głównym celem tego artykułu jest omówienie różnicy między konkurencyjnym i niekonkurencyjnym testem ELISA.
Co to jest konkurencyjny test ELISA?
Konkurencyjny test ELISA mierzy stężenie antygenu w próbce poprzez wykrywanie zakłóceń sygnału. Tutaj test wykorzystuje antygen inhibitora. Stąd jest to rodzaj hamowania ELISA. Podczas tej procedury antygeny obecne w próbce konkurują z wybranym antygenem referencyjnym o wiązanie z określoną ilością znakowanego przeciwciała. Co więcej, procedura ta rozpoczyna się inkubacją próbki z nadmiarem znakowanego przeciwciała. Ponadto antygen referencyjny powinien być wstępnie pokryty wielodołkową płytką testową. Następnie mieszaninę próbki należy dodać do płytki testowej zawierającej antygen referencyjny. Wolne przeciwciała zwiążą się z antygenem referencyjnym w zależności od ilości antygenu w próbce. W związku z tym, jeśli jest obecnych więcej antygenu próbki, zostanie wykrytych mniej antygenu referencyjnego. W ten sposób tworzy słabszy sygnał.
Rysunek 01: ELISA
W przeciwieństwie do tego, gdy próbka zawiera mniej antygenu, coraz więcej antygenu referencyjnego zajmie przeciwciała i da silny sygnał. Ponieważ konkurencyjny test ELISA daje silniejszy sygnał, gdy próbka zawiera niewielką ilość antygenów, konkurencyjny test ELISA jest bardzo czułym testem, nawet dla próbek z niewielką liczbą antygenów.
W niektórych konkurencyjnych zestawach ELISA, zamiast znakowanego przeciwciała używany jest znakowany antygen. Tutaj znakowany antygen i antygen próbki będą współzawodniczyć o wiązanie z pierwotnym przeciwciałem. Podobnie, gdy ilość antygenu w próbce jest niska, ilość znakowanego antygenu, który wiąże się z przeciwciałami, będzie wyższa i wytworzy silniejszy sygnał.
Co to jest niekonkurencyjny test ELISA?
Spośród czterech typów testu ELISA, trzy typy to niekonkurencyjny test ELISA. Są to bezpośredni ELISA, pośredni ELISA i kanapkowy ELISA. Wszystkie trzy formaty działają zgodnie ze wspólną zasadą ELISA z niewielkimi różnicami w ich metodologiach.
Bezpośredni test ELISA wykorzystuje pierwszorzędowe przeciwciało znakowane enzymem. W związku z tym nie wymaga przeciwciała drugorzędowego. Dlatego bezpośredni test ELISA jest szybszy niż inne rodzaje testu ELISA. Pierwotne przeciwciało będzie bezpośrednio wiązać się z unieruchomionym docelowym antygenem obecnym na płytce. W związku z tym nastąpi reakcja enzym-substrat, wytwarzając widoczny sygnał.
Rysunek 02: Test ELISA
W przeciwieństwie do bezpośredniego testu ELISA, pośredni test ELISA wykorzystuje nieoznakowane przeciwciało pierwszorzędowe i przeciwciało drugorzędowe znakowane enzymem. Gdy przeciwciało pierwszorzędowe zwiąże się z unieruchomionym antygenem, przeciwciało drugorzędowe wiąże się z przeciwciałem pierwszorzędowym. Enzym w przeciwciele drugorzędowym będzie reagował z antygenem i wytworzy widoczny sygnał. Test kanapkowy ELISA różni się zarówno od bezpośredniego, jak i pośredniego testu ELISA. Tutaj przeciwciało jest unieruchomione na ścianie płytki testowej.
Jakie są podobieństwa między konkurencyjnym i niekonkurencyjnym testem ELISA?
- Konkurencyjny i niekonkurencyjny test ELISA to dwa rodzaje technik testów immunosorpcyjnych.
- Są to bardzo elastyczne i wrażliwe techniki.
- Ponadto, zarówno kompetycyjny, jak i niekompetycyjny test ELISA to testy immunoenzymatyczne.
- Ponadto obie metody generują sygnał w wyniku reakcji enzym-substrat.
Jaka jest różnica między konkurencyjnym i niekonkurencyjnym testem ELISA?
Konkurencyjny test ELISA to rodzaj testu ELISA, który polega na uzupełnieniu antygenu analitycznego i antygenu znakowanego dla ograniczonej ilości swoistego przeciwciała. Z drugiej strony, nie istnieje taka konkurencja między antygenem będącym przedmiotem zainteresowania a antygenem referencyjnym w niekompetycyjnym teście ELISA. Jest to zatem kluczowa różnica między konkurencyjnym i niekonkurencyjnym testem ELISA. Podobnie, konkurencyjny test ELISA jest testem hamowania ELISA, podczas gdy niekompetycyjny test ELISA nie jest testem hamowania. Jest to więc również różnica między konkurencyjnym i niekonkurencyjnym testem ELISA.
Co więcej, konkurencyjny test ELISA jest bardziej odpowiedni do pomiaru małej ilości antygenu będącego przedmiotem zainteresowania. To delikatna metoda. Z drugiej strony niekompetycyjny test ELISA nie zależy od liczby antygenów obecnych w próbce. Dlatego jest to również różnica między konkurencyjnym i niekonkurencyjnym testem ELISA.
Poniższa infografika wyjaśnia różnicę między konkurencyjnym i niekonkurencyjnym testem ELISA.
Podsumowanie – ELISA konkurencyjna vs niekonkurencyjna
Konkurencyjny i niekompetycyjny test ELISA to dwa główne typy testów ELISA lub testów immunoenzymatycznych. Podsumowując różnicę między konkurencyjnym i niekompetycyjnym testem ELISA, konkurencyjny test ELISA opiera się na współzawodnictwie między antygenem będącym przedmiotem zainteresowania a antygenem referencyjnym wobec ograniczonej ilości przeciwciał. Dlatego konkurencyjny test ELISA jest również nazywany testem hamowania ELISA. Z drugiej strony niekompetycyjny test ELISA nie opiera się na współzawodnictwie między antygenami docelowymi a antygenami referencyjnymi. Wykorzystuje nadmiar znakowanego swoistego przeciwciała w stosunku do analitu będącego przedmiotem zainteresowania. Jest to zatem kluczowa różnica między konkurencyjnym i niekonkurencyjnym testem ELISA. Bezpośredni test ELISA, pośredni test ELISA i test kanapkowy to trzy główne typy niekonkurencyjnego testu ELISA.
